中国文昌鱼肽聚糖识别蛋白（PGRP）初步的研究.pdf

摘 要 文昌鱼(amphioxus)在进化中具有重要的地位，研究其免疫分子的功能可 以从中了解免疫的进化线索。肽聚糖识别生门(peptidoglycanrecognitionprotein PGRP)是一类在天然免疫系统L卜『起着免疫口{刖、信号传导以及抗菌效应的分子。 PGRP分别在进化}：的低等和高等的生物类群中虽然有相似的地方，但也有较大 的差异性。在果蝇中，PGRP分予在免疫通路中起着关键的信号识别及信号传导 的作用，并作为清道夫降解体内的肽聚糖；在高等的哺乳动物中，PGRP起着抗 菌的效应分了的作用。为了研究PGRP的功能的演化过程，我们从中国文昌鱼消 化道eDNA文库中获得了三个pgrp基因的部分序列以后，激发我们去研究它们存 文昌鱼这种过渡型生物中所发挥的功能。 比对，发现中国文吕鱼的三个PGRP与多种物种都有具有很高的相似性，为研究 该基因家族的演化过程提供了重要线索。 在基冈组水平上，本文通过基因组PCR的方法成功克隆出3个pgrp的基因 组内含子序列和上下游的非翻译区序列。为该基凼家族的基因组演化和表达涧控 些拷贝数的变化町能反映了在文昌鱼这一物利，中新的基因功能的产生。通过实时 定量PCR的方法，发现i个pgrp基因在革兰氏阳性利阴性的细菌感染后都有不 同程度的上调表达，尤其是在阳性菌的感染后，而且在不同的纽织中的分布模式 有所差异。提示这三个分子跟细菌的急性感染有直接的关系。为了进一步了解文 昌鱼PGRPI具体的细胞功能定位，我们构建丫PGRPl的真核转染载体，并将其 转染到了哺乳动物细胞巾进行定位，与对照相比，发现其定位于细胞质中，并存 细胞的培养上清中出现，提示了该分子在以上的部分起作用。另外，本文通过构 建体外原核表达载体，从大肠杆菌BL21中成功表达出了中国文吕鱼PGRPl与 TRX的融合蛋白，并通过金属离子亲和柱的方法初步纯化了重组蛋白。通过PGN 结合实验发现该蛋白与两种类型的PGN都能结合，ELISA方法发现对Lys型的 PGN亲和力更高‘些，为我们做进一步的功能研究提供了重要线索。 总之，通过对三个中国文吕龟pgrp的基因序列和基因组序列的获得、感染 前后的mRNA的变化情况以及文昌鱼PGRPl蛋白的细胞定位和活性，结合更多 相关的信息，将有利于与我们进…步了解免疫系统的演化过程。 关键词：文昌鱼；肽聚糖识别蛋白；基因克隆；基因组结构；Real—timePCR 真核转染；重组原核表达。 PGRP ofChinese The on Amphioxus Study Family Abstract an statusinthe whichwecanknowhow ’fhe has evolution，from amphioxusimportant theimmune systemevolutes．Peptidoglycanrecognition plays the roleintheinnateimmune functionisconservefrominsectsto vital system．Their alsohave differences．Inthefiuit PGRPmembers mammals，but they bigger fly，the thebacteriaandtransducethe totwomainimmune mainlyrecognize signal pathways， thePGRPsinmammal and thePGNonthebacteria