《园艺植物生物技术》第六章－分子标记优化.ppt

* 园艺植物生物技术 * AFLP的实验操作 Procedures for AFLP * 园艺植物生物技术 * AFLP标记的特征 Characterization of AFLP 理论上，可以采用的限制性内切酶及选择碱基的种类、数目很多，所以标记数目是无限的。 每次谱带在50-100条之间，多态性检测非常有用 可用于作为遗传图谱和物理图谱的位标。 可用于分析基因组DNA、克隆的DNA大片段， 对模板浓度不敏感，即使模板浓度存在差异，也会得到强度一致的谱带。 * 园艺植物生物技术 * 分子标记在植物科学研究中的应用DNA Markers Application in Plant Science 品种鉴别与产权保护 种质资源研究 分子标记辅助育种 构建遗传图谱、基因定位与克隆 * 园艺植物生物技术 * 小香 橼 柠檬 粗柠檬 红黎檬 马蜂柑 来檬1 来檬 澳洲指 橘 澳洲沙 檬 道县野橘 立花橘 本地早 长沙橘 宁波金柑 山金柑 卡西大翼橙 宜昌橙 红河橙 伏令夏橙 葡萄 柚 酸 橙 沙田柚 富民枳 哈里米 唐河枳 早实枳 飞龙枳 酒饼勒 蚝壳刺 99 99 98 79 74 79 65 49 50 0.02 第1 组 第7 组 第6 组 第5 组 第4 组 第3 组 第2 组 第8 组 第9 组 第10 组 分子标记在柑橘资源研究中的应用 华中农业大学柑橘课题组 * 园艺植物生物技术 * 重点推荐文献：Recommend References * /chemistry/laureates/1993/mullis-lecture.html /chemistry/laureates/1993/mullis-autobio.html Mullis, K.B. (1990) The unusual origin of the polymerase chain reaction. Scientific American. 262 (4) 56-65. * PCR传奇－－一个生物技术的故事。 保罗·拉比诺著，朱玉贤译。上海科技教育出版社， 1998。 * 基因组扩增（较高灵敏度和特异性） * HERE IS ANOTHER EXAMPLE SHOWING UNIFORM SPACING OF A SERIAL DILUTION, ROBUSTNESS IN REPLICATES, AND RANGE OF ASSAY * * 园艺植物生物技术 * Hybridization based Marker-RFLP 性质： RFLP（Restriction Fragment Length Polymorphism)是DNA-DNA杂交的分子标记。 原理:这种多态性是由于限制性酶切位点或位点附近的DNA区域发生变异所引起的。 * 园艺植物生物技术 * RFLP多态性的类型 Type of PM in RFLP Markers * 园艺植物生物技术 * Processes for RFLP Manipulation 1.高质量DNA的提取 液氮研磨 加入提取缓冲液 温浴 氯仿处理 离心（上清液） 酒精 TE溶解 质量检测（或纯化） 提取DNA的两个条件：抑制DNA酶活性；加入去污剂破碎细胞。 * 园艺植物生物技术 * 2.限制性酶切： 取10—15微克DNA，加入约5U于最适温度下保温12—18小时。 Processes for RFLP Manipulation * 园艺植物生物技术 * 3.转膜 4.探针标记 5.杂交 6.洗膜 7.放射自显影 RFLP的操作 Processes for RFLP Manipulation * 园艺植物生物技术 * Examples of RFLP Analysis * 园艺植物生物技术 * By Cheng et al, 2003. (Published in PMBR) 华中农业大学柑橘课题组 Examples of RFLP Analysis in Citrus * 园艺植物生物技术 * PCR Based Marker—RAPD Williams 等人于 1990 年首创的一种 DNA 技术，被称为 Random amplification of Polymorphic DNA (随机扩增的多态性DNA）。 * 园艺植物生物技术 * 原理：以 PCR 为基础 , 利用人工合成的约 10 b的随机序列寡核苷酸作引物 , 以生物的基因组 DNA 为模板 , 进行 PCR 扩增 , 产生不连续的 DNA