120305高二生物《微生物的实验室培养》(课件).ppt

注意： 移液管需要经过灭菌。操作时，试管口和移液管离火焰1~2cm处. 涂布平板的所有操作都应在火焰附近进行。结合平板划线与系列稀释的无菌操作要求，想一想，第2步应如何进行无菌操作？ 问题讨论 半固体培养基： 2.不同的微生物往往需要采用不同的培养基配方 2.不同的微生物往往需要采用不同的培养基配方 3.不管哪种培养基，一般都含有水、碳源、和氮源、 无机盐等营养物质，另外还需要满足微生物生长对pH、特殊营养物质以及氧气的要求。 1000mL牛肉膏蛋白胨培养基的营养构成 氢元素、氧元素 H2O定容在1000mL 无机盐 NaCl 5g 氮源和维生素 蛋白胨10g 碳源、磷酸盐和维生素 牛肉膏5g 提供的主要营养 培养基组分 ?4.培养基的用途 ?4.培养基的用途 液体培养基：增菌、工业生产 固体培养基：纯化（分离），　　　　　　鉴定、活菌计数、　　　　　　保藏菌种 半固体培养基：动力检测 三、无菌技术 三、无菌技术 1.无菌技术的概念 　　无菌操作泛指在培养微生物的操作中，所有防止杂菌污染的方法。 1.无菌技术的概念 　　无菌操作泛指在培养微生物的操作中，所有防止杂菌污染的方法。 　　成功地培养微生物的关键。 三、无菌技术 （1）消毒定义： 2.消毒与灭菌的概念及两者的区别 （2）灭菌的定义： 微生物实验室培养的基本操作程序 1. 器具的灭菌 2. 培养基的配制 3. 培养基的灭菌 4. 倒平板 5. 微生物接种 6. 恒温箱中培养 7. 菌种的保存 四、实验操作 (一)制备牛肉膏蛋白胨培养基(用于培养细菌) 倒平板操作 1.培养基灭菌后，需要冷却到50 ℃左右时，才能用来倒平板。你用什么办法来估计培养基的温度？ 关于倒平板操作的问题讨论： 1.培养基灭菌后，需要冷却到50 ℃左右时，才能用来倒平板。你用什么办法来估计培养基的温度？ 答：可以用手触摸盛有培养基的锥形瓶，感觉锥形瓶的温度下降到刚刚不烫手时，就可以进行倒平板了。 关于倒平板操作的问题讨论： 2.为什么需要使锥形瓶的瓶口通过火焰？ 2.为什么需要使锥形瓶的瓶口通过火焰？ 答：通过灼烧灭菌，防止瓶口的微生物污染培养基。 3.平板冷凝后，为什么要将平板倒置？ 3.平板冷凝后，为什么要将平板倒置？ 答：平板冷凝后，皿盖上会凝结水珠，凝固后的培养基表面的湿度也比较高，将平板倒置，既可以使培养基表面的水分更好地挥发，又可以防止皿盖上的水珠落入培养基，造成污染。 4.在倒平板的过程中，如果不小心将培养基溅在皿盖与皿底之间的部位，这个平板还能用来培养微生物吗？为什么？ 4.在倒平板的过程中，如果不小心将培养基溅在皿盖与皿底之间的部位，这个平板还能用来培养微生物吗？为什么？ 答：空气中的微生物可能在皿盖与皿底之间的培养基上滋生，因此最好不要用这个平板培养微生物。 （二）纯化大肠杆菌 接种方法有： 平板划线法和稀释涂布平板法 微生物的接种技术： 平板划线的操作方法 问题讨论 1.为什么在操作的第一步以及每次划线之前都要灼烧接种环？在划线操作结束时,仍然需要灼烧接种环吗？为什么？ 答：第一步灼烧是为了避免接种环上可能存在的微生物污染培养物；每次划线前灼烧是为了杀死上次划线结束后，接种环上残留的菌种，使下一次划线时，接种环上的菌种直接来源上次划线的末端，从而通过划线次数的增加，使每次划线时菌种的数目逐渐减少，以便得到菌落。划线结束后灼烧，能及时杀死接种环上残留的菌种，避免细菌污染环境和感染操作者。 2.在灼烧接种环之后，为什么要等其冷却后再进行划线？ 2.在灼烧接种环之后，为什么要等其冷却后再进行划线？ 答：以免接种环温度太高，杀死菌种。 3.在作第二次以及其后的划线操作时，为什么总是从上一次划线的末端开始划线？ 3.在作第二次以及其后的划线操作时，为什么总是从上一次划线的末端开始划线？ 答：划线后，线条末端细菌的数目比线条起始处要少，每次从上一次划线的末端开始，能使细菌的数目随着划线次数的增加而逐步减少，最终能得到由单个细菌繁殖而来的菌落。 一旦划破，会造成划线不均匀，难以达到分离单菌落的目的； 二是存留在划破处的单个细胞无法形成规矩的菌落，菌落会沿着划破处生长，会形成一个条状的菌落。 稀释涂布平板法 微生物的实验室培养 　　是一切肉眼看不见或看不清楚的微小生物的总称。 一、微生物 微生物 病毒 细菌 放线菌 真菌 原生动物 原核生物界 原生生物界 真菌界 病毒