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120305高二生物《微生物的实验室培养》(课件)
注意: 移液管需要经过灭菌。操作时,试管口和移液管离火焰1~2cm处. 涂布平板的所有操作都应在火焰附近进行。结合平板划线与系列稀释的无菌操作要求,想一想,第2步应如何进行无菌操作? 问题讨论 半固体培养基: 2.不同的微生物往往需要采用不同的培养基配方 2.不同的微生物往往需要采用不同的培养基配方 3.不管哪种培养基,一般都含有水、碳源、和氮源、 无机盐等营养物质,另外还需要满足微生物生长对pH、特殊营养物质以及氧气的要求。 1000mL牛肉膏蛋白胨培养基的营养构成 氢元素、氧元素 H2O定容在1000mL 无机盐 NaCl 5g 氮源和维生素 蛋白胨10g 碳源、磷酸盐和维生素 牛肉膏5g 提供的主要营养 培养基组分 ?4.培养基的用途 ?4.培养基的用途 液体培养基:增菌、工业生产 固体培养基:纯化(分离), 鉴定、活菌计数、 保藏菌种 半固体培养基:动力检测 三、无菌技术 三、无菌技术 1.无菌技术的概念 无菌操作泛指在培养微生物的操作中,所有防止杂菌污染的方法。 1.无菌技术的概念 无菌操作泛指在培养微生物的操作中,所有防止杂菌污染的方法。 成功地培养微生物的关键。 三、无菌技术 (1)消毒定义: 2.消毒与灭菌的概念及两者的区别 (2)灭菌的定义: 微生物实验室培养的基本操作程序 1. 器具的灭菌 2. 培养基的配制 3. 培养基的灭菌 4. 倒平板 5. 微生物接种 6. 恒温箱中培养 7. 菌种的保存 四、实验操作 (一)制备牛肉膏蛋白胨培养基(用于培养细菌) 倒平板操作 1.培养基灭菌后,需要冷却到50 ℃左右时,才能用来倒平板。你用什么办法来估计培养基的温度? 关于倒平板操作的问题讨论: 1.培养基灭菌后,需要冷却到50 ℃左右时,才能用来倒平板。你用什么办法来估计培养基的温度? 答:可以用手触摸盛有培养基的锥形瓶,感觉锥形瓶的温度下降到刚刚不烫手时,就可以进行倒平板了。 关于倒平板操作的问题讨论: 2.为什么需要使锥形瓶的瓶口通过火焰? 2.为什么需要使锥形瓶的瓶口通过火焰? 答:通过灼烧灭菌,防止瓶口的微生物污染培养基。 3.平板冷凝后,为什么要将平板倒置? 3.平板冷凝后,为什么要将平板倒置? 答:平板冷凝后,皿盖上会凝结水珠,凝固后的培养基表面的湿度也比较高,将平板倒置,既可以使培养基表面的水分更好地挥发,又可以防止皿盖上的水珠落入培养基,造成污染。 4.在倒平板的过程中,如果不小心将培养基溅在皿盖与皿底之间的部位,这个平板还能用来培养微生物吗?为什么? 4.在倒平板的过程中,如果不小心将培养基溅在皿盖与皿底之间的部位,这个平板还能用来培养微生物吗?为什么? 答:空气中的微生物可能在皿盖与皿底之间的培养基上滋生,因此最好不要用这个平板培养微生物。 (二)纯化大肠杆菌 接种方法有: 平板划线法和稀释涂布平板法 微生物的接种技术: 平板划线的操作方法 问题讨论 1.为什么在操作的第一步以及每次划线之前都要灼烧接种环?在划线操作结束时,仍然需要灼烧接种环吗?为什么? 答:第一步灼烧是为了避免接种环上可能存在的微生物污染培养物;每次划线前灼烧是为了杀死上次划线结束后,接种环上残留的菌种,使下一次划线时,接种环上的菌种直接来源上次划线的末端,从而通过划线次数的增加,使每次划线时菌种的数目逐渐减少,以便得到菌落。划线结束后灼烧,能及时杀死接种环上残留的菌种,避免细菌污染环境和感染操作者。 2.在灼烧接种环之后,为什么要等其冷却后再进行划线? 2.在灼烧接种环之后,为什么要等其冷却后再进行划线? 答:以免接种环温度太高,杀死菌种。 3.在作第二次以及其后的划线操作时,为什么总是从上一次划线的末端开始划线? 3.在作第二次以及其后的划线操作时,为什么总是从上一次划线的末端开始划线? 答:划线后,线条末端细菌的数目比线条起始处要少,每次从上一次划线的末端开始,能使细菌的数目随着划线次数的增加而逐步减少,最终能得到由单个细菌繁殖而来的菌落。 一旦划破,会造成划线不均匀,难以达到分离单菌落的目的; 二是存留在划破处的单个细胞无法形成规矩的菌落,菌落会沿着划破处生长,会形成一个条状的菌落。 稀释涂布平板法 微生物的实验室培养 是一切肉眼看不见或看不清楚的微小生物的总称。 一、微生物 微生物 病毒 细菌 放线菌 真菌 原生动物 原核生物界 原生生物界 真菌界 病毒
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