- 1、本文档共51页,可阅读全部内容。
- 2、有哪些信誉好的足球投注网站(book118)网站文档一经付费(服务费),不意味着购买了该文档的版权,仅供个人/单位学习、研究之用,不得用于商业用途,未经授权,严禁复制、发行、汇编、翻译或者网络传播等,侵权必究。
- 3、本站所有内容均由合作方或网友上传,本站不对文档的完整性、权威性及其观点立场正确性做任何保证或承诺!文档内容仅供研究参考,付费前请自行鉴别。如您付费,意味着您自己接受本站规则且自行承担风险,本站不退款、不进行额外附加服务;查看《如何避免下载的几个坑》。如果您已付费下载过本站文档,您可以点击 这里二次下载。
- 4、如文档侵犯商业秘密、侵犯著作权、侵犯人身权等,请点击“版权申诉”(推荐),也可以打举报电话:400-050-0827(电话支持时间:9:00-18:30)。
- 5、该文档为VIP文档,如果想要下载,成为VIP会员后,下载免费。
- 6、成为VIP后,下载本文档将扣除1次下载权益。下载后,不支持退款、换文档。如有疑问请联系我们。
- 7、成为VIP后,您将拥有八大权益,权益包括:VIP文档下载权益、阅读免打扰、文档格式转换、高级专利检索、专属身份标志、高级客服、多端互通、版权登记。
- 8、VIP文档为合作方或网友上传,每下载1次, 网站将根据用户上传文档的质量评分、类型等,对文档贡献者给予高额补贴、流量扶持。如果你也想贡献VIP文档。上传文档
查看更多
遺传性疾病的分子诊断
遗传性疾病的分子诊断
上海第二医科大学附属瑞金医院
樊绮诗
——诊断策略和工具
用分子生物学技术通过检测基因而达到诊断疾病的目的是生物学者在分子生物学技术发展的最初阶段就有的设想。1976年人们开始在实验室进行研究,1984年以来,基因检测在许多国家已成为常规项目,主要用于遗传性疾病的诊断。
一、遗传性疾病的分类
常染色体连锁遗传性疾病
——致病基因位于常染色体
性染色体连锁遗传性疾病
——致病基因位于性染色体
常染色体连锁遗传性疾病
常染色体隐性遗传——位于一对常染色体上的两个等位基因均发生突变才能产生临床症状,此时所导致的相应疾病即为常染色体连锁隐性遗传性疾病。
同一对染色体中只有一个等位基因发生突变的个体称为杂合子,二个等位基因均发生突变的个体称为纯合子。
囊性纤维变:常染色体连锁隐性遗传(7q31)
常染色体连锁显性遗传——位于一对常染色体上的二个等位基因之一发生突变即产生临床症状,所导致的相应疾病即为常染色体连锁显性遗传性疾病。
特点:家系中患者数目较多,大多情况下每一代均有患者。
Huntington舞蹈症:常染色体显性遗传(4p16.3)
性染色体连锁遗传性疾病
X染色体连锁遗传:大多为隐性 (如甲型血友病、杜氏肌营养不良症),显性遗传非常罕见。
Y染色体连锁遗传
二、遗传性疾病中常见的分子异常
遗传性疾病的产生是由于一个(或数个)基因发生异常导致这些基因所载有的遗传信息受到改变,而发病是通过遗传物质的表达产物——蛋白质(或酶)的表现异常所致。
基因突变主要包括三大类,即点突变、片段性突变和动态性突变。
(一)点突变
点突变:DNA分子中单个碱基的替换
终止密码子突变:点突变导致提前产生终止密码,或终止密码突变而编码一个氨基酸使肽链延长。
错义突变、无义突变、移码突变
各种点突变所造成的后果:蛋白质分子量改变、蛋白质合成量下降、无蛋白质合成。
(二)片段性突变
核苷酸的丢失和增多
缺失:基因中硷基(遗传物质)的丢失
插入:外来基因片段插入某一基因序列中
倍增:基因内部某一段序列发生重复
基因重排:基因组中原来不在一起的基因
由于某些原因组合排列在一起。
(三)动态性突变
以三核苷酸为单位的重复序列,在传递过程中不稳定,会发生扩展,即子代的重复次数往往较亲代大为增加,因此又称动态性突变。
脆性X综合征:CGG重复
少年脊髓型共济失调:GAA重复
……
三、遗传性疾病基因诊断的策略
(一)直接诊断策略
基因诊断的直接策略就是通过各种分子生物学技术检测基因的遗传缺陷,因此直接诊断的前提是被检测基因的正常序列和结构必须被阐明。
直接诊断由于是直接揭示遗传缺陷,因而比较可靠。
(二)间接诊断策略
间接诊断的实质是在家系中进行连锁分析,通过分析可确定个体来自双亲的同源染色体中的哪一条为致病染色体,从而判断该个体是否带有致病基因。
间接诊断不是寻找 DNA 的遗传缺陷,而是通过分析DNA的遗传标记的多态性估计被检者患病的可能性。
四、基因诊断所采用的技术
(一) 直接诊断所采用的技术
DNA片段性突变的检测
(1)Southern 印迹技术
将基因组DNA用限制性酶水解成无数片段经凝胶电泳后用碱处理使凝胶中的DNA变性为单链,转移至硝酸纤维素膜或尼龙膜上,用标记探针与变性单链杂交,可使特异条带显影。
(2)多重PCR技术
在一个PCR反应体系中放入多对引物,当基因的外显子发生缺失时,根据条带缺失的数目和引物相应的位置,可判断基因中哪一个或哪几个扩增部位发生缺失。
2. 点突变
(1) 已知点突变的检测方法
a)PCR-RFLP
利用正常序列或突变序列是否处于限制性内切酶的酶切位点而设计。若点突变处于某一限制性内切酶的酶切位点内,可在突变点两侧设计引物,使PCR产物含有该突变序列。用相应的内切酶对正常产物和突变产物进行水解并作电泳分离,可根据水解片段的大小和电泳位置区分二者。
b)等位基因特异性寡核苷酸杂交
被检基因经PCR扩增后转移到膜上,分别与长度为15~20bp、经标记的正常序列和突变序列的寡核苷酸探针杂交。由于20个碱基中仅一个碱基差异即可使DNA分子的Tm值下降 5~7.5℃,因此通过严格控制杂交条件,可使PCR产物仅与完全互补的探针杂交,根据有无杂交信号即可判断被检者的扩增片段中是否带有突变点。
C)PCR-ELISA
将PCR产物用ELISA方法加以
您可能关注的文档
- 運营分析报告.ppt
- 運算定律与简便计算整理与复习.ppt
- 運筹管理电子化的商业经营.ppt
- 運营管理案例.ppt
- 運输作业实务.ppt
- 運输工具动态管理系统空运舱单管理系统.ppt
- 運输工具名称、航次号、提运单号.ppt
- 運输科技软体应用期末报告高雄地区中油自营站稽核路线规划.ppt
- 運算律探索.ppt
- 運输类飞机型号合格审定实践及展望.ppt
- 2024年中国具身智能行业研究-知行合一-拥抱AI新范式.pdf
- 2024年中国祛痘套装行业概览-量肤定制-天然与有机祛痘产品的兴起.pdf
- 锑系列深度一-三问光伏玻璃需求.pdf
- 2024生物制造与微生物产业研究报告-生物经济新引擎.pdf
- 汽车零部件行业深度研究-汽车内外饰竞争格局分散-电动智能化有望推升集中度.pdf
- 2024年中国端侧大模型行业研究:算力优化与效率革命 如何重塑行业生态.pdf
- 医药与健康护理行业深度报告-AI+制药-AI技术蓬勃发展-AI+制药行业潜力巨大.pdf
- 男性车市洞察报告(2024版)-警惕比亚迪的“老男孩攻势”.pdf
- 2024中国智能电动汽车域控制器产业分析报告.pdf
- 医药生物行业深度研究-供需齐振驱动血制品行业快速发展.pdf
文档评论(0)