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醫学细胞生物学实验
医学细胞生物学实验
徐志浩
遗传与基因工程教研室
院系楼西侧一楼
2016年
掌握细胞冻存与复苏的原理。
熟悉细胞冻存复苏的一般操作过程。
掌握细胞计数的一般方法。
医学细胞生物学实验
实验目的
细胞冻存的必要性
冻存温度
冻存操作对细胞的损伤:冰晶损伤、溶液损伤
冻存保护剂
冻存复苏的原则:慢冻速融
实验原理
1、细胞冻存
医学细胞生物学实验
1ml鸡血+1ml生理盐水→1500rpm离心5min(配平)→弃上清→加2ml冻存液→混匀 (空气吹打法) →分装至1ml的冻存管→标记→液氮罐口(-60~-70 ℃ )10min →液氮中冻存10min (-196℃ )。
无菌操作;
保护剂;
细胞浓度;
梯度降温(慢冻);
防止冻伤;
防爆;
冻存管做好标记。
2、细胞复苏与计数
医学细胞生物学实验
取出冻存管→ 37℃水浴1min融化→转入离心管→加至5ml培养液→混匀→ 1500rpm离心5min→弃上清→加1ml培养液→混匀→取0.5ml →加入等体积台盼蓝→染色1min →计数 → 计算细胞活力和细胞浓度。
如何区别死细胞和活细胞?
细胞活力(率):活细胞所占的比率。
3、细胞计数板的使用
医学细胞生物学实验
计数之前熟悉计数板构造并熟练掌握计数方法。
使用计数板前用酒精棉球轻轻擦拭干净。
先盖盖玻片,再滴细胞悬液。
压线细胞:计上不计下、计左不计右。
计数方向:按一定顺序。
1mm
1mm
0.1mm
0.1mm3
10-4ml
7.5cm
3.5cm
医学细胞生物学实验
冻存复苏操作。
染色时间。
计数时间。
复苏细胞活力影响因素
作业
列出细胞冻存与复苏的主要操作步骤。
计算细胞浓度和细胞活力,并分析影响细胞活力的原因。
医学细胞生物学实验
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