动物性食品理化检验（扬州大学）第二节 喹诺酮类药物残留.pptVIP

第二节 喹诺酮类药物残留分析 一、概述 （一）理化性质 酸碱两性、游离基易溶于稀酸或稀碱，在pH6～8的水溶液中溶解度最小，其盐易溶于水。 在UV区有强的特征吸收：240 ～300nm, 330 ～350nm; 具有荧光：λex=280-330nm, λem=410-430nm 代谢 N-脱烷基反应 N-氧化反应、羟化反应 乙酰化、磺酰化 葡萄糖醛酸结合反应 残留 残留物主要为原形药物 恩诺 环丙，培氟 诺氟 代谢物仍具有活性的，应列入总残留物。 单诺沙星主要代谢途径： 喹诺酮类MRLS： 大多数尚缺乏数据 欧盟：恩诺30μg/kg(ENR+CIP) JECFA：沙拉80μg/kg；单诺50μg/kg 检测方法：LC/UVD, LC/FLD，LC/MS LOD：1-5 μg/kg LOQ：5-10 μg/kg 国外允许使用情况 二、检测方法 不适宜GC分析(高极性、高熔点) HPLC（UVD、FLD、MS） HPTLC （一）RP-HPLC检测 C8、C18、苯基柱 甲醇-乙酸盐缓冲液系统，加四氢呋喃（THF）或四乙基铵（TFA）改善峰形 UVD、FLD、MS检测 1、HPLC/UVD检测 2、HPLC/FLD检测 λex=277-280nm, λem=365-445nm 检测限：＜10 μg/kg 干扰少，灵敏度比UVD高10-20倍 LC/FLD测定乳汁中环丙、恩诺、沙拉、双氟色谱图 3、HPLC/MS检测 LC/MS检测常用ESI、TSI离子化方式 主要碎片离子：[M+H]+， [M+H-H2O]+， [M+H-CO2]+， [M+H-CO2-哌嗪]+， 299 368 386 三、样品前处理方法 pH≤4 或pH≥9时，易溶于水，可被酸/碱溶液LLE pH6～8水溶性最小，易为有机溶剂反萃取 提取方法 对固体样品，大多数使用酸化或碱化溶剂作为提取剂:乙腈-氢氧化铵；乙腈-偏磷酸；甲醇-磷酸；甲醇-乙酸；乙醇-乙酸；丙酮-氢氧化钠；丙酮-乙酸。丙酮或丙酮溶液是良好的提取溶剂。 净化方法 酸-碱LLE 是净化喹诺酮类的基本方法 SPE C18或阳离子交换柱（SCX，PRS） 例：肌肉中恩诺沙星和环丙沙星的测定 色谱分离 C18柱，乙腈-0.029mol/L H3PO4(TEA 调pH3.0)(20+80) FLD 278/445nm 四、其他测定方法免疫分析法 多克隆抗体或单克隆抗体制备，多采用N-羟基琥珀酰亚胺活性酯（NHS/EDC）法 喹诺酮类残留的HPTLC 分析 HPTLC固定相粒度更细（5-7 um)，分离效率更高，检测限可达ng或pg。 硅胶G，展开剂：甲醇-氨水（85+15）312nm 下有淡蓝色荧光 薄层色谱法（thin layer  chromatography, TLC) 可作微量样品的分析，也可用于大量样品的制备。 固定相均匀涂布于薄板上，混合样品点于一端，经展开剂展开后，根据标准品及样品中组分的比移值定性；根据斑点的光密度值通过薄层扫描仪可定量分析。 检测：显色剂比色测定，UV吸收、荧光发射 固定相：硅胶、氧化铝、纤维素、聚酰胺 展开剂：多元有机溶剂。分离弱极性组分，选择弱极性展开剂；分离强极性组分，选择强极性展开剂。 显色剂：硫酸溶液、三氯化铁、碘化钾溶液、茚三酮等。有VU吸收的，可直接检测UV吸收或使用荧光板检测荧光熄灭程度。 薄层色谱各种展开装置 * * （二）代谢与残留 CH3－ 　培氟沙星 C2H5－ 　恩诺沙星 环丙沙星 恩诺 恩诺 加拿大 恩诺 澳大利亚 喹恶酸 恩诺、奥比 恩诺、达氟、氧氟、麻堡、喹恶酸 恩诺、达氟、奥比、二氟、喹恶酸 日本 沙拉、喹恶酸 恩诺、二氟、麻堡　 恩诺、氟甲喹、麻堡、达氟 殴盟 恩诺、二氟、麻堡、奥比 恩诺、沙拉 美国 鱼 宠物 家禽 家畜 国别 色谱条件： Merk Lichrospher RP-18,5μm,250×4mm; 乙腈-25nmol/L磷酸（7+93）,0.1mol/L氯化四丁基胺调pH3.09, 1ml/min, 280 或295nm. A：标准液 B：空白 C：空白+5 μg/kg标准添加 沙拉沙星（3）、双氟沙星（4） 368 242 342 342 对于液体样品，使用与水不相溶的低极性溶剂或强酸、强碱性水溶液。如氯仿、二氯甲烷、乙酸乙酯，高氯酸、盐酸、氢氧化钠溶液或缓冲液 样品 乙醇-乙酸（99+1） 提取