动物性食品理化检验（扬州大学）第七节 同化激素类药物残留分析.pptVIP

第七节 促生长剂残留分析 概述 同化激素与抗生素并列为最重要的兽药残留。长期摄入导致内分泌、代谢失调，发育异常或肿瘤，多数具潜在的致癌作用。 　可分为 甾类同化激素 非甾类同化激素 β2受体激动剂(苯乙胺类药物） 一、甾类与非甾类同化激素 1、结构*甾类同化激素性激素：雄激素、雌激素、孕激素 糖皮质激素 非甾类同化激素(非甾类雌性激素) 已烯雌酚（DES）、已烷雌酚、玉米赤霉醇、玉米赤霉酮（烯酮ZLE） 2、理化性质 脂溶性化合物，溶于极性有机溶剂和植物油 含羟基、酮基、双键等活性基团，易衍生化呈色或产生荧光 200-400nm内UV吸收较强 某些同化激素的UV吸收光谱 代谢及残留毒理 多被代谢，原形药物较少；消除快，临床多以缓释剂非肠道给药，埋植剂、油注射剂局部注射后，注射部位长时期高浓度药物残留。肝肾脂肪残留较多，肉较少。 主要经肾、胆汁排泄，尿液、粪便是现场和活体监测的重要样本。 干扰内分泌系统，潜在的致癌作用。 残留监控 1988年殴盟禁止所有同化激素用于促生长。我国90年代也陆续禁止用于促生长。只在育肥期使用，耳基部皮下埋植,不得深部注射（屠宰时耳部弃去）。 规定在可食用组织中不得检出。 生物样品中同化激素测定方法 3、测定方法 （1）RP-HPLC柱：C8、C18、-CN流动相：甲醇-水/甲醇-乙腈-THF 检测：UVD、PDA 荧光检测/电化学检测（少用）检测限：≥1 μg/Kg （2）LC-RIA/ELISA 收集LC流出组分，浓缩后进行 既提高检测灵敏度，又避免假阳性。 (3) LC/MS/MS (4) GC/MS 是目前残留或兴奋剂检测中常用的方法。 检测限：0.01-1 μg/Kg 进行GC/MS，需衍生化，衍生化方法较多：硅烷化、酰化、氧化、肟化、形成结合物等。 4、样品前处理 一般过程: 水解蛋白质 水解结合物 LLE萃取 SPE净化 或HPLC 或衍生化GC 净化方法同化激素的分析对样品净化要求较高。SPE净化，常采用正相和反相SPE联合应用；HPLC净化被广泛使用。收集不同时间的流出液，经浓缩后衍生化，测定；IAC净化也较多地被使用。 二、β2受体激动剂(苯乙胺类药物） 药理学上属拟肾上腺素药物 理化性质 极性较大，溶于多数极性或中等极性溶剂（稀酸稀碱、甲醇、乙酸乙酯、氯仿等）。临床上多为盐酸盐，易溶于水。 含有苯环，在220-280nm 有吸收或有荧光。 代谢及残留毒理 主要以原形经肾排泄，眼组织浓度可高于肝10倍。连续多次用药后，食用组织中肝肾浓度最高，肌肉、脂肪中最低。肝、肾、视网膜为检测样本；活体监测时以尿为样本。 大剂量使用促生长，易出现残留毒副作用。 残留限量 JECFA推荐克仑特罗的ADI为0～0.004μg/Kg　 0.24 μg/60Kg/d 克仑特罗的残留限量：不得检出 检测方法 检测限 0.01 μg/Kg  定量限 0.02 μg/Kg 二、测定方法 β2受体激动剂残留量很低，对残留分析方法的灵敏度要求很高。免疫测定法和GC/MS能满足残留测定要求。检测限达0.5 μg/Kg ,RIA/ELISA法为筛选方法，GC/MS为确证方法。 克仑特罗的竞争ELISA检测 检测原理抗原、标记抗原与包被抗体竞争性结合， 以B/B0值为纵坐标，以标样浓度的对数值为横坐标，做标准半对数曲线。 特异性交叉反应率 回收率 试剂盒检测操作流程 平衡 配液 编号加样 加酶标抗原 温育 洗涤 显色 终止 测定 试剂盒检测操作流程 提取与净化尿样直接或离心后加样；肝肾 离心 离心 上清过SPE柱 试剂盒检测操作流程 肌肉 离心水层 离心 上清 离心 上清过SPE柱 试剂盒检测操作流程 眼球 吸取液体 ，倍比稀释后加样 SPE柱净化：C18，包被β-兴奋剂抗体的琼脂凝胶聚丙烯柱   GC/MS确证 HP-5,DB-5，0.32mm×50m EI, SIM监测 检测离子：m