动物性食品理化检验（扬州大学）第六节 氯霉素类.pptVIP

第六节 氯霉素类 (Chloramphenicols)药物残留分析 一、概述 结构 残留毒性 —— 造血机能障碍 白细胞减少； 全血细胞减少 （灰色综合征gray syndrome)； 再生障碍性贫血。 二、测定方法 GC/ECD RP-HPLC/UVD 色谱质谱联用(GC/MS,LC/MS) 免疫测定 1、GC/ECD (GB/T 18932.20-2003) 需衍生化CAP-OH + TMCS CAP-（TMS) 2 牛奶中三种氯霉素的GC色谱分析 前处理奶5ml 离心 牛奶中三种氯霉素的GC色谱图 2、RP-HPLC 柱：C18 流动相：甲醇/乙腈-磷酸/醋酸盐 甲醇/乙腈-水 UVD：CAP 278nm TAP、FF 225nm  检测限：0.001-0.02mg/kg 氯霉素、甲砜、氟甲砜霉素的UV吸收光谱图 3、色谱/质谱联用 三甲基硅烷衍生化，GC/EI/MS 检测限 0.005mg/kg LC/APCI/MS 检测限0.002mg/kg 4、ELISA法(GB/T 18932.21-2003) 样品前处理 　试样2.00g　　　 1.0ml乙酸 乙酯　　　　0.5mlPBS溶解，供elisa测定　　　　　　 三、样品前处理 取样后冷冻保存,临分析时切碎、均质。 氯霉素葡萄糖醛酸结合物以β-葡萄糖醛酸苷酶水解后测定 黄尾鱼肉中氯霉素、甲砜霉素、氟甲砜霉素的提取 样品10g 提取溶剂对黄尾鱼中CAPS回收率影响 黄尾鱼中CAPS的HPLC色谱图 A：10ng标样；B：0.1mg/kg添加标样柱：Inerstil C18，流动相：甲醇-水（20+80），1ml/min, 225-270 nm，柱温50℃ 四、免疫分析 1966年，Hamburger首次制备了氯霉素抗体。 1984年，Arnold等建立了CAP的放射免疫测定法，检测限达0.2μg/kg。 已报道的免疫方法：RIA、ELISA、免疫荧光毛细管电泳法、免疫亲和色谱净化（IAC）-HPLC/UVD。 完全抗原合成： * * 理化性质 微溶于水，易溶于有机溶剂 酸、碱及加热下水解 强UV吸收，λmax 278nm 大多以葡萄糖醛酸结合而失活 PG过敏致死率1:67000 CAP再障率1：30000 MRLS：不得检出 方法检出限达0.01mg/kg ECD检测 0.005mg/L 柱：填充柱或毛细管柱 乙腈25ml SPE C18 净化 硅烷化 衍生 GC/ECD测定 毛细管柱,25cm×0.2mm,柱温150-270o,气化室250o,检测器320o,载气流速0.7ml/min,ECD检测 FF:氟甲砜 TAP:甲砜 Mcap:间硝基氯霉素 A:空白 B: 0.01mg/L标准 C:标准添加 氟甲砜霉素 甲砜霉素 氯霉素 4ml水 4ml乙酸乙酯 4000rpm　10min N2吹干 体液样本：用乙酸乙酯、甲醇和乙腈提取后 可直接用GC、HPLC分析。 奶或组织样：提取后需要用液-液萃取或 SPE柱作净化。 提取溶剂 残渣 浓缩 4%NaCl 正已烷去脂 乙酸乙酯反萃取 浓缩 甲醇-水  1+1 LC测定 SPE柱净化 已烷/乙腈-水95+5 C18、Florisil、氧化铝 83.4 89.8 75.5 甲醇 98.1 98.4 93.6 乙酸乙酯 94.7 97.4 81.1 乙腈 氟甲砜霉素 甲砜霉素 氯霉素 回收率（%） 提取溶剂 *