动物性食品理化检验（扬州大学）第三节 β-内酰胺类.pptVIP

第三节 β-内酰胺类(β-lactam  antibiotics)药物残留分析 一、概述 结构 PENS 理化特性 * 酸性物质，难溶于水，常用其钠或钾盐，  盐的水溶性好； * 6-APA无紫外吸收，PENS的UV吸收来自侧链  苯环（200-235） ；7-ACA上有共轭体系， 260nm有吸收； * β-内酰胺环不稳定。酸、碱、β-内酰胺 酶及某些溶剂（如甲醇）均可使环断裂。 残留现状 广泛使用，动物性食品中残留较多，耐药性增加，引起过敏反应。奶中残留突出。 一般以原形为残留标志物。 欧盟对食品中β-内酰胺类规定的MRLS （μg/kg) 二、测定方法--- HPLC 正相、反相、阴离子交换色谱 柱：ODS 检测器 UVD:头孢氨苄 254nm、头孢噻呋 270nm、头孢匹林290nm 青霉素类： 　　　柱前衍生化UV检测：325nm测定 柱前衍生化荧光检测 柱前衍生化UV测定： 在咪唑或1,2,3- 三唑的催化下，与HgCl2 形成青霉烷酸硫醇汞衍生物，在325nm测定，干扰少。 柱前衍生化荧光检测 β-内酰胺类本身无荧光，通过衍生化产生具有荧光的产物。 衍生化试剂： 氨苄青霉素在甲醛和三氯乙酸溶液中可形成荧光衍生物； 9-芴基甲基氯甲酸酯，4-溴甲基-7-甲氧香豆素。 LC/MS方法 LC/ESI/MS技术广泛用于测定牛奶和肉中的β-内酰胺类残留确证。 三、前处理方法 取样 加拿大卫生实验室（HAL）规定，至少要取40g样品混合后分成小样，－76℃保存。均质后当天进行分析，以免青霉素酶的分解。 提取 用水或酸化的有机溶剂 HAL：肉样用钨酸钠、硫酸和水提取青霉素并脱蛋白，对鸡蛋、血浆、组织液、牛奶、尿液、酸乳酪和干酪中的青霉素的分离效果较好。 蛋白沉淀 目的：避免药物与生物大分子（可溶的） 结合；减少对色谱柱的损伤或对 检测的干扰。 常用蛋白沉淀剂： 甲醇、乙腈、酸化乙腈（pH4.4～ 4.0)、硫酸、钨酸钠等。 净化方法----- SPE 不同的C18SPE柱对回收率的影响： 碳含量＞ 17%，回收率＞80% 碳含量＜17%，回收率＜70% 缓冲液的浓度及种类对回收率的影响： 磷酸钠盐 ＞ 磷酸钾盐 磷酸盐浓度＜0.07mol/L 回收率下降 组织中青霉素类提取与净化流程图 基质固相分散技术（Matrix solid-phase dispersion，MSPD） 1989年由美国Louisiana州立大学的Staren Barker教授首次提出的一种崭新的SPE技术，可同时分散和萃取固体、半固体样品。MSPD浓缩了传统的样品前处理中所需的样品均化、组织细胞裂解、提取、净化等过程，避免了样品均化、沉淀、离心、转移、乳化、浓缩等造成的被测物的损失。 MSPD操作 例：肝组织中青霉素类的MSPD 净化法 肝组织 0.5g 免疫测定法 完全抗原的合成 1、突出侧链结构，合成针对某种β-内酰胺的残留检测 2、突出母核结构，合成针对族特异性抗体 复　习　题 第一章　概论 1、动物性食品理化检验的主要内容有哪些？ 2、简述动物性食品中化学物残留对人的危害？化学物污染的种类有哪些？ 3、何为环境化学物？可通过哪些途径危害人类？ 4、术语：药物残留、兽药残留、MRL、NOEL、ADI、休药期？ 5、食品理化检验常用检验方法有哪些？试举例说明。 6、总体？样品？原始样品？小样？平均样品？ 7、取样类型？何时选择性取样，何时客观性取样？取样时应注意些什么？ 8、原始样品取样量较大时，采用何法缩分为平均样品？平均样品用什么容器盛装？ 9、无菌取样时应注意些什么？样品除进行重复试验外，还须进行哪些对照试验？ 10、对建立的分析方法，可从哪些方面对该分析方法进行评价？对分析方法的精密度评价有哪些指标？ 11、LOD？LOQ？ 12、现行食品安全卫生质量管理体系主要有哪些？ 13、动物性食品样品前处理的常规方法有哪些？动物性食品中化学物残留的提取分离可用哪些方法？ 第二章　动物性食品新鲜度检验 1、新鲜度检查的一般方法有哪些？ 2、肉品新鲜度检验感观检验主要有哪几方面？实验室检验指标有哪些？常规实验室检验指标是什么？ 3、什么是挥发性盐基氮？为什么TVBN可作为肉品新鲜度检验的指标？测定的方法有哪些？测定原理及计算公式各是什么？