动物性食品理化检验（扬州大学）第四节 氨基苷类.pptVIP

第四节 氨基苷类（aminoglycoside antibiotics)残留分析 一、概述 结构 性质 呈碱性，极性大， 水溶性高，不含 共轭结构UV吸收 弱，活性基团多, 易衍生化反应 多由几种结构相近的混合物组成。 庆大：C1、C1a、C2、C2a（药典中规定了相互 比例） 卡那：A、B、C三种异构体 A≥75% B＜50%（药效高但毒性大） 新霉素：主要有B、C两种异构体 B：85～90% 残留毒性 肾脏易蓄积 肌肉休药期为5d, 肾脏则要60～90d 肾毒性 卡那、庆大、紫苏霉素较大 耳毒性 婴幼儿对其敏感 耐药性产生 氨基苷类残留的MRLS(mg/kg) 二、测定方法 RP-HPLC 离子对色谱法 离子交换色谱 RP-HPLC 柱子 C18 C8 流动相 醋酸缓冲液-甲醇；醋酸缓冲 液-乙腈 检测 柱前或柱后衍生化 常用的衍生化试剂有：邻苯二 甲醛（OPA）、1-氟-2,4-二硝基苯 （FDNB）、丹酰氯（DansCl)、磺 酰氯苯（BSC）等。 检测器 UVD FLD 　　　　　质谱检测 HPLC/PDA测定牛奶中庆大霉素 离子对色谱 柱子： C18、 C8 流动相: 醋酸盐、磷酸盐缓冲液 加硫酸钠 离子对：烷基磺酸盐（庚烷、戊烷、辛 烷、已烷、甲苯磺酸盐） 含氟羧酸类（五氟丙酸、七氟丁酸） 离子交换色谱法 强碱性阴离子交换色谱 强极性阳离子交换色谱 要求仔细调节pH、温度、离子强度，在氨基苷类抗生素分析中未广泛应用。 免疫测定法 作为筛选方法，在牛奶样品中应用较多，检测限在1~10ng/ml。 利用氨基苷类结构上的伯氨基、羟基或醛基制备半抗原结合物。 Mahon等 三、前处理方法 血浆、尿样 体液样品中游离氨基苷类较多，易提取。常用蛋白沉淀剂：乙腈、甲醇、三氯醋酸、高氯酸等。 组织样品 氨基苷类与组织结合较强，比从体液中提取困难。 一般程序： 也可用含CN的吸附剂，用MSPD技术前处理。 存在问题 目前方法，多适合血浆、体液等成分较简单的或高含量的组织样品 灵敏度和通用性差 检测限难达MRL水平（0.1μg/kg） 回收率低 异构体多，色谱分离过程复杂，分离条件难控制 * * 1.0(K) 2.0(Eg)/同猪 0.5(M)/2.0(其他） 同猪 0.2（MK)/同猪 壮观 0.2(MK) 同牛 同牛 同牛 0.6（M/F/L) 链霉素/双氢链 0.25(M) 0.25(M) 0.25(M) 0.15(MK) 0.75(L) 0.75(L) 1.25(L) 0.50(L) 1.00(K) 1.00(K) 1.25(K) 0.75(K) 0.50(F) 1.00(F) 1.25(F) 1.00(F) 0 .25(Et/M) 新霉素 5.0(K) 2.0(L)/ 5.0(K) 2.0(L) 0.1(M/F) 0.1(Et) 0.1(M/F) 0.2(MK) 庆大 家禽 猪 羊 牛 药物 色谱柱：Zorbax SB-C18,150×2mm;流动相：醋酸-水-甲醇（50+250+700,含5g庚烷磺酸钠);衍生化试剂:OPA; PDA检测; 40μg/ml添加标样,IS:萘替米星; 下方线为空白样品 不用于LC/MS HSA-COOH EDC R-NH2 庆大、卡那 HAS-CONH-R 体液 去蛋白 离心 调pH至碱性 二氯甲烷 氯仿 萃取液 浓缩、溶解 上机 SPE柱 组织 缓冲液或强酸性液 匀浆 离心，上清 SPE柱 上机 *