动物性食品理化检验（扬州大学）第五节 四环素类tetracyclines.pptVIP

第五节 四环素类（tetracyclines) 药物残留分析 一、概述 结构 理化性质 毒理 沉积在骨骼和牙齿中 肝富集，损伤 诱导耐药性产生 欧盟关于四环素残留的MRLS 二、测定方法 薄层色谱法（TLC/HPTLC） 高效液相色谱法（HPLC） 联用技术（TLC/MS，LC/MS） （一）TLC 1、正相TLC(NP-TLC) 板: 硅藻土、硅胶、纤维素 饱和EDTA-Na溶液预展开,130℃ 2h活化 溶剂:氯仿-甲醇-5%Na2-EDTA(65+20+5) 异丙醇-乙酸乙酯- 5%Na2-EDTA(3+4+7) 丙酮- 5%Na2-EDTA(10+1) 2、RP-TLC 展开溶剂中加草酸减少拖尾、消除金属离子的影响 C8、C18 吸附剂 3、显色剂 氯化镁、氯化铁、五氯化锑、硫酸、对硝基苯胺、重氮盐 4、检测限 根据所用显色剂不同而不同。在0.01～0.1μg. TLC简便、快速，在制剂杂质分析、奶、蜂蜜等四环素类残留中得到广泛应用。 (二) HPLC 四环素类易与金属离子螯合 拖尾 加有机酸改善 分离最佳pH为2.0 柱 C8、C18 流动相 甲醇-乙腈-草酸 检测 300nm，400nm 检测限 0.02～0.05mg/kg 四环素类分离的HPLC 色谱图 （三）色质联用技术 LC/MS LC/ESI/MS 、 LC/TSI/MS、  LC/APCI/MS、 LC/FAB/MS、 LC/PB/MS TLC/FAB/MS 三、样品前处理 酸性脱蛋白剂提取  0.1mol/L Na2-EDTA-Mcllvaine缓冲液 pH4.0 磷酸氢二钠 27.6g 柠檬酸 12.9g Na2-EDTA 37.2g 水 至1000mL 1、鱼、畜禽组织、蛋和奶的前处理流程 牛肝脏中不同溶剂添加回收率 2、蜂蜜中四环素类提取 蜂蜜中干扰成分较多，还需经阳离子交换柱（Baker 10-COOH) 再净化 蜂蜜中四环素类提取流程图 A：四环素类标准品；B：空白添加标准品；C：空白Chemcosorb 3C8;甲醇-乙腈-0.1mol/L草酸pH3.0(1+1.5+7);1ml/min;350nm * * 1 A 4 2 10 B C D *酸碱两性 *难溶于水，易溶于酸性（稳定）或碱性溶液（降解）中 *强UV吸收（350nm)、荧光 *易与金属离子螯合 差向异构 1 脱水 0.1(MK) 0.1(M) 0.2(Eg) 0.3(L) 各种食品动物 原形 各种四环素 0.6(K) MRL(mg/kg) 动物 标示残留物 药物 四环素类在反相薄层板上的分离图 A:板C8;甲醇-乙腈-0.5mol/L草酸 (1:1:4) pH2.0 B:板C18;甲醇-乙腈-0.5mol/L草酸 (1:1:2) pH2.0 A:硅胶 饱和EDTA-Na溶液预展 氯仿-甲醇-5% Na2-EDTA(65+20+5) B:C8 甲醇-乙腈-0.5mol/L草酸(1+1+4,pH3.0) 360nm 四环素在正相与反相TLC上的分离比较 0.1mol/L 母体 0.2mol/L 杂质 A：C8;甲醇-乙腈0.1mol/L草酸(1+1.5+5),360nm B:C18;甲醇-乙腈0.2mol/L草酸(1+1+3.5),400nm 净化 Baker 10 C18；Bond Elut C18 DC 68 40 68 50 *