动物性食品理化检验（扬州大学）第一节磺胺检测.pptVIP

第三章 动物性食品中药物残留检测 动物性食品中常见的药物残留 抗菌药物 抗寄生虫药物 促生长药物 第一节 磺胺类药物残留分析 一、概述 理化特点 临床应用 磺胺允许残留量 二、磺胺残留测定方法 UV、FL、TLC、GC——早期 RP-HPLC GC/MS——确证 HPLC/MS CE（毛细管电泳） SFC（超临界色谱法） ELISA—— 筛选 1、RP-HPLC 欧美官方实验室猪肾中SM2的测定方法 前处理方法： 样2.5g 均质 上清 合并上清 氨甲醇收集液 挥干 流动相溶解 色谱检测 C18柱 150×4.6mm 流动相：0.01mol/L醋酸铵-甲醇-乙腈 （85+7.5+7.5，V/V/V） 检测波长：266nm 检测限：0.01mg/kg(10 μg/ kg) 回收率：＞80%( 添加0.1mg/kg) 线性范围：5-30ng LOD与MRL的关系 现在的HPLC检测方法与上述方法类似，多为C8、C18柱；流动相多为甲醇-水系统或乙腈系统，用酸调节pH呈偏酸性。 检测器 UVD、FLD、PDA UVD检测器 波长的选择 选择待测组分的最大吸收波长 避开干扰组分的吸收 兼顾其他待测成分的吸收 磺胺衍生化检测 柱后衍生化 -----仪器改动 N,N′-二甲氨基苯甲醛 450nm 检测 柱前衍生化------方便 荧光胺 样品经氯仿提取后，与荧光胺反应(1min内完成），生成具有荧光的物质。荧光检测器（FLD）检测，λex=405nm，λem=495nm 柱后衍生化装置 牛奶空白样和添加标准品的HPLC/FLD 色谱图 2、GC/MS 残留分析的确证方法，是各国官方实验室采用的方法 磺胺的GC测定，须柱前衍生化。一般用甲基化试剂使其甲基化。重氮甲烷 GC柱：中等极性，如：3%OV-17，10%OV-101，5%OV-7 柱温：260℃，280 ℃，或程序升温 离子源：EI，70 eV 色谱峰的确证须满足三个条件： tR待测组分= tR 标准品　 tR相对偏差不超过5%　 两者MS主要碎片离子相同 两者选择离子丰度之比应符合要求 定性测定时相对离子丰度的最大允许偏差 例： 3、HPLC/MS/MS 2003年蜂蜜中16种磺胺残留量测定标准 柱：C18 柱温：35 ℃ 流动相：乙腈+0.01mol/L乙酸铵溶液 （12+88） 流速：0.8ml/min 进样量：40μl 离子源：ESI 蜂蜜中磺胺HPLC/MS定性/定量离子对 LC/MS/MS LC/MS不能准确定性时，可进行二级质谱 SM2的LC/MS/MS 三、前处理方法 1、提取-净化的经典方法提取溶剂： 单一溶剂：丙酮、温甲醇、乙腈、乙酸乙酯、二氯甲烷 混合溶剂：三氯甲烷-丙酮（甲醇、乙酸乙酯） 酸、缓冲液：0.1/1.03.0mol/L HCl、磷酸缓冲液、EDTA缓冲液 酸/缓冲液+有机溶剂 净化方法 ⑴液-液萃取(LLE) ⑵经典色谱柱 硅胶吸附：乙腈、乙腈 –水、氢氧化钠溶液、三氯甲烷洗脱 碱性氧化铝：不同比例乙腈 –水 ⑶固相萃取（solid phase extraction,SPE)柱 各种SPE柱 免疫亲和色谱(immunoaffinity chromatography, IAC) 固定相是连接有抗体的惰性基质 对与抗体匹配的药物组分有选择性吸附，是残留分析中最有效的净化方法之一。 IAC的基础：完全抗原的合成，抗体的获得。 磺胺类药物完全抗原的合成 重氮化-偶合法 戊二醛法 琥珀酰化碳化二亚胺法 针对药物的多抗的制备 完全抗原 免疫动物 血清 单克隆抗体的制备 多抗或单抗的制备，是ELISA快速筛选方法建立的基础 * * 消除特点 乙酰化、羟基化、结合物为主要代谢物 半衰期 SMZ 10～12h SMM ，SD＞10 ～15 h SMD SMM＞1周(～ 38h) 残留危害：过敏、贫血、粒细胞减少、耐药性增加、致癌致突变（SM2） 25 100 100 100 100 残留限量 μg/ kg 奶 奶 肝/肾 脂肪 肌肉 靶组织 牛 牛/羊 所有食品 动物 动物种类 SM2 Parent drug总量 标志残留物 药物 磺胺类 SM2 20世纪80年代后 3ml醋酸-丙酮(1+1) 12m