动物性食品理化检验（扬州大学）色谱的基本知识.pptVIP

Chromatography色谱法基本知识 色谱分类 液相色谱(LC) 其他色谱方法 气相色谱法的特点 液相色谱法的特点 二、色谱图及基本参数 1．流出曲线和色谱峰 2．基线、噪音和漂移 3．保留值：色谱定性参数 4．色谱峰的区域宽度：色谱柱效参数 1．流出曲线和色谱峰 流出曲线（色谱图）：电信号强度随时间变化曲线 色谱峰：流出曲线上突起部分 续前 不对称因子 2．基线、噪音和漂移 基线：当没有待测组分进入检测器 时，反映检测器噪音随时间 变化的曲线（稳定—平直直线） 噪音：仪器本身所固有的，以噪音 带表示（仪器越好，噪音越小） 漂移：基线向某个方向稳定移动 （仪器未稳定造成） 3．保留值：色谱定性参数 保留值：表示被测组分从进样到色谱柱后出现浓度最大值所需要的时间(或所需载气的体积)，叫做保留值。 保留时间tR：从进样开始到组分出现浓度极大点时 所需时间，即组分通过色谱柱所需要的时间 死时间t0(tm)：不被固定相溶解或吸附的组分的保留时 间（即组分在流动相中所消耗的时间） 调整保留时间tR’：组分的保留时间与死时间之差值， 即组分在固定相中滞留的时间 图示 续前 相对保留值ri,s（选择性系数α）：调整保留值之比 4．色谱峰的区域宽度：色谱柱效参数 标准差σ：正态分布色谱曲线两拐点距离的一半 σ→对应0.607h处峰宽的一半 注：σ↓小，峰↓窄，柱效↑高 半峰宽W1/2：峰高一半处所对应的峰宽 峰宽W：正态分布色谱曲线两拐点切线与基线相交 的截距 图示 色谱柱效能的参数 例 某色谱柱长2.1m，测得某组分的保留时间为5min42s，在色谱纸上量得色谱峰的宽度为1.2cm，已知纸速为2cm·min-1，求塔板数及塔板高度。 塔板高度为1.45mm。 三、色谱的定性和定量分析 定性方法 3.加入已知物增加峰高法 在未知样品加入纯标准品，峰高增加的组分即可能为这种已知物。 定量方法 1.峰面积 对称峰： A=1.065 W1/2 h 不对称峰 A = 1/2 h(W0.15 + W0.85） 　 W0.15和 W0.85分别为峰高0.15倍和0.85倍处的峰宽 定量方法 归一法,内标法,外标法。各有其优缺点。 1 归一法 1.求峰面积 定量准确度决定于 2.求相对校正因子 3.定量方法 2.定量校正因子f 为什么要用f？ 相同质量的不同组分检测器有不同的响应值 ╳ 例如用TCD，N2作载气测O2，H2的百分含量 若H2、O2峰面积相同, 百分含量是否相同？ 　不能用下式计算：  H2的热导系数大,TCD响应大,但实际含量小，必须用校正因子. A f % H2 500 0.1 9.1 O2 500 1 90.9 O2% = 90.9% 绝对校正因子f 　　决定于检测器的灵敏度，f不易测定。 ∴常用相对校正因子f’ 通常所指的校正因子都是指相对 校正因子。 相对校正因子 　 即某组分i与标准物质s的绝对校正因子之比。 表示方法 重量校正因子/摩尔校正因子 (1)重量校正因子 w --重量 A --峰面积 (2)摩尔校正因子 M--分子量 准确定量分析时,应该用自己测定的校正因子,而不用文献值,因为校正因子随检测器类别,使用载气的不同而不同 …… 优点:是相对法，与进样量无关,定量较准确 缺点:要求 全出峰(样品所有组分都要出峰) 　全知峰(有所有组分的标准品) * * 一.概述 俄国植物