星形胶质细胞来源的il-17a对缺血性脑卒中神经再生和功能恢复的影响及机制研究-effects of astrocyte-derived il - 17a on nerve regeneration and functional recovery in ischemic stroke and its mechanism.docx
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星形胶质细胞来源的il-17a对缺血性脑卒中神经再生和功能恢复的影响及机制研究-effects of astrocyte-derived il - 17a on nerve regeneration and functional recovery in ischemic stroke and its mechanism
独创性声明本人郑重声明,本学位论文是本人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果的总结。尽我所知,除文中已经标明引用的内容外,本论文不包含任何其他个人或集体已经发表或撰写过的研究成果。对本文的研究做出贡献的个人和集体,均已在文中以明确方式标明。本人完全意识到本人将承担本声明引起的一切法律后果。学位论文作者签名:日期:年月日学位论文版权使用授权书本学位论文作者完全了解学校有关保留、使用学位论文的规定,即:学校有权保留并向国家有关部门或机构送交论文的复印件和电子版,允许论文被查阅和借阅。本人授权华中科技大学可以将本学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索,可以采用影印、缩印或扫描等复制手段保存和汇编本学位论文。本论文属于必威体育官网网址□,在年解密后适用本授权书。不必威体育官网网址□。(请在以上方框内打“√”)学位论文作者签名:指导教师签名:日期:年月日日期:年月日目录英文缩略词表及中文对照1中文摘要2引言21材料与方法22结果32讨论41参考文献43第二部分P38丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)/CALPAIN1信号通路在CIS后IL-17A的促神经再生中的作用49引言49材料与方法50结果52讨论58参考文献60第三部分IL-17A在CIS后的细胞来源以及分泌机制62引言62材料与方法62结果66讨论69参考文献71第四部分IL-17A对体外培养的SVZ区神经祖/干细胞的增殖和分化的影响及其作用机制73引言73材料与方法73结果78讨论83全文总结85参考文献87综述88参考文献96附录113致谢115英文缩略词表及中文对照英文缩写英文全称中文名称IL-17ACISinterleukin-17Acerebralischemicstroke白介素17A缺血性脑卒中rIL-17ASVZrecombinantIL-17Asubventricularzone重组白介素17A蛋白脑室下区NSCsNMDARMMPneuralstem/precursorcellsN-methyl-D-aspartatereceptormatrixmetalloproteinase神经干/祖细胞N-甲基-D-天冬氨酸受体基质金属蛋白酶HMGB1NOhigh-mobility-group-box-1nitricoxide高迁移率族蛋白1一氧化氮DGdentategyrus齿状回MCAOmiddlecerebralarteryocclusion大脑中动脉栓塞BrdUbromodeoxyuridine溴脱氧尿苷PH3DCXphospho-histoneH3doublecortin磷酸化组蛋白H3双皮质素SNAP-25DAPIsynaptosomal-associatedprotein-25kDa4,6-diamidino-2-phenylindole突触小体相关蛋白-25二脒基苯基吲哚DMSODimethylsulfoxide二甲基亚砜EBSTelevatedbodyswingtest提高的躯体摆动实验MAPKmitogen-activatedproteinkinase丝裂原活化蛋白激酶ERKextracellularregulatedproteinkinases细胞外调节蛋白激酶JNKSBDPc-JunN-terminalkinaseaII-spectrinbreakdownproductsc-Jun氨基末端激酶血影蛋白降解产物GFAPglialfibrillaryacidicprotein神经胶质酸性蛋白LVlateralventricle侧脑室中文摘要第一部分IL-17A在缺血性脑卒中(CIS)恢复期的表达变化以及神经再生和功能恢复的影响目的:确定CIS后IL-17A的时间与空间表达趋势,以及明确IL-17A是否可促进CIS后神经再生与功能恢复。方法:成年雄性IL-17A敲除(IL-17Aknock-out,il-17a-/-)或野生型(wide-type,WT)小鼠大脑中动脉栓塞,缺血60分钟后再灌注。野生型小鼠从CIS后14天开始,连续14天经鼻腔给予重组白介素17A蛋白(recombinantIL-17A,rIL-17A)或溶剂对照(vehicle),或者经侧脑室给予小鼠IL-17A中和抗体(anti-IL-17AmAb)或IgG1同型对照抗体。CIS后27天腹腔注射BrdU,间隔8个小时,16小时后灌注取材检测祖细胞增殖活性。CIS后7天腹腔注射BrdU,间隔8个小时候再次注射一次,连续注射7天,35天灌注取材检测祖细胞寿命。CIS后1、3、7、14、21、28、42或70天免疫印迹和实时定量PCR检测缺血侧大脑半球IL-17A的表达。CIS后7、14、21或28天免疫荧光和免疫印迹检测脑室下区(subventricularzone,SVZ)和海马区IL-17A的表达
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