第22讲_免疫学检测技术基本原理.pptVIP

免疫学检测技术的基本原理 一. 体外抗原抗体反应的特征 1.高度特异性 抗原的表位与抗体的抗原结合点结构互补。 2.可见性 抗原与相应抗体结合后能肉眼直接观察。 二. 抗原抗体反应的影响因素 1.温 度：最适温度为37℃。 2.酸碱度：最适pH =6-8。 3.电解质：可促进抗原与抗体的结合。 常用生理盐水。 三. 检测抗原和抗体的体外试验 （一）凝集反应 颗粒性抗原（RBC、细菌等）与相应抗体 结合形成肉眼可见凝集物的现象或反应。 1．直接凝集试验 （1）玻片凝集试验：用于定性测抗原。 如ABO血型鉴定，细菌的鉴定、分型等。 （2）试管凝集试验：用于定量测抗体 如肥达氏反应。 2．间接凝集试验 如类风湿因子的测定等。 （二）沉淀反应 可溶性抗原（血清蛋白、组织浸液等）与 相应抗体结合而形成可见沉淀物的反应。 因该类反应多在半固体琼脂凝胶中进行，故 又称为琼脂扩散试验或免疫扩散。 3．免疫电泳 其方法是先电泳、后扩散。主要用于抗原成分的分析，亦可用于诊断如骨髓瘤、性联低丙种球蛋白血症等的诊断。 2．酶免疫测定（ Enzyme Immunoassay, EIA） 用酶标记的抗体进行的抗原抗体反应。EIA将抗原抗体反应的特异性与酶催化作用的高效性相结合，通过酶作用于底物后显色来判定结果。 其检测的敏感度可达pg-ng/ml水平。 Ab + E AbE Ag + AbE AgAbE + 底物 呈色反应 3．放射免疫测定法（RIA） 敏感度可达pg水平， 其标记物为125I、131I等。 常用于微量物质的检测，如激素、IgE等。 免疫胶体金技术 * * 抗原抗体比例对反应现象的影响 1．单向免疫扩散 用于定量测抗原。 如检测血清免疫球蛋白、C3等含量 。 2．双向免疫扩散 主要用于定性检测抗原或抗体，抗原组成及两 种抗原相关性分析。 4．免疫比浊 用于定量测抗原。该法快速、简便。 5）免疫比浊法 在一定量的抗体中分别加入递增量的抗原，经一定时间后形成免疫复合物。用浊度计测量反应液体的浊度，复合物形成越多，浊度越高，绘制标准曲线并根据反应液体的浊度，推算样品中的抗原含量。 （三）免疫标记技术 用荧光素、同位素或酶等示踪物质 标记抗体 （或抗原）进行抗原-抗体反应。 标记物质与抗体（或抗原）的化学连接未改变 抗体（或抗原）的免疫学特性，且极大的提高了 反应的灵敏度，可以对微量物质进行定量、定性 或定位检测。 免疫标记技术主要有三种基本类型： 免疫荧光技术 免疫酶技术 同位素标记技术 1．免疫荧光技术(Immunofluorescence Technique) 用荧光素与抗体连接成荧光抗体，再与待测标本的抗原反应，，置荧光显微镜下观察，抗原抗体复合物散发出荧光，借此对标本中的抗原作鉴定和定位。 （1）常用荧光素 异硫氰酸荧光素（FITC）， 显黄绿色。 藻红蛋白（PE），显红色。 （2）方法 *直接荧光法： 优点--特异性强 缺点--每检测一种抗原必须制备相应的荧光抗体。 *间接荧光法 优点--敏感性比直接法高，且制备一种荧光素标记的二抗可 用于多种抗原的检测， 缺点--非特异性荧光增加。 EIA （1）标记的酶： 辣根过氧化