HIV检测技术教学课件.ppt

(2)化学发光或免疫荧光试验 采用发光或荧光底物，既可检测抗体，也可联合检测抗原抗体。 HIV抗原或抗体包被于固相载体，加入待检样品和酶或荧光标记的HIV抗原或抗体，加发光或荧光底物，用发光或荧光仪测定结果。有效试验的阴性和阳性对照必须符合试剂盒规定。 （3）快速检测（RT）及其它检测试验 优点:试验简便快速，适用于应急检测、门诊急诊检测。不需专门设备和人员培训,一般可在10～30分钟内得出结果。 缺点:肉眼判断较主观、价格较贵、结果不易保存。 （1）明胶颗粒凝集试验（PA） 将HIV抗原致敏明胶颗粒作为载体，与待检样品作用，混匀后保温（一般为室温）。当待检样品含有HIV抗体时，经抗原致敏的明胶颗粒与抗体发生抗原-抗体反应，根据明胶颗粒在孔中的凝集情况判读结果。 快速诊断试剂 PA法原理 （2）斑点EIA和斑点免疫胶体金（或胶体硒） 以硝酸纤维膜为载体，HIV抗原点状固定在膜上,加血清样品。 斑点EIA法用酶标记抗体，以后步骤同ELISA。 斑点免疫胶体金（或胶体硒）用红色的胶体金（或胶体硒）A蛋白标记，用渗滤法作为洗涤方法。 阳性结果在膜上抗原部位显示出有色斑点。反应时间在10 min以内，使用抗原量少。 快速诊断试剂 金标诊断试验原理 快速诊断试验 （3）免疫层析试验(金标法、硒标法) 以硝酸纤维膜为载体。 加样区：预包被胶体金-抗原/胶体金-protein A结合物 测试区（T）：固定有重组HIV抗原， 质控区：抗HIV单克隆抗体/抗-protein A抗体 快速诊断试剂 全血样品 加50ul样品于样品垫中 手指血方法 静脉血方法 加一滴缓冲液 15分钟内读取结果 硒标法操作步骤 病人条 质控条 快速诊断试验 优点:试验简便快速，适用于应急检测、门诊急诊检测。不需专门设备和人员培训,一般可在10～30分钟内得出结果。 缺点:肉眼判断较主观、价格较贵、结果不易保存。 注意：一定要将试剂平衡至室温 快速诊断试剂 HIV抗体确认试验 确认试验的试剂： 必须是经国家食品药品监督管理局注册批准、在有效期内的试剂。 确认试验方法： 免疫印迹试验(WB) 条带免疫试验(LIATEK HIVⅢ) 放射免疫沉淀试验(RIPA)及免疫荧光试验(IFA) 国内常用的确认试验方法是WB。 HIV抗体确认实验结果 a 强阳性对照（HIV-1和HIV-2） b弱阳性对照（HIV-1） c阴性对照 d典型的HIV-2血清阳性反应 a b c d gp160 gp120 p66 p55 p51 gp41 p39 p31 P24 p17 血清对照 HIV-2特异带 WB确认HIV感染的判定标准和判定结果的基本原则 HIV-1抗体阳性：gp41和Gp120/gp160或加上gp41加上P24 阴性：无HIV抗体特异带出现。 可疑：出现HIV抗体特异条带，但不足以判定阳性 HIV抗体确认试验不确定结果 P24 ：非特异性反应（孕妇，正常人） Gp160：非特异性反应，感染早期，感染晚期 Gp160，gp120：非特异性反应，感染早期，感染晚期 Gp160，p24：非特异性反应，感染早期，感染晚期 HIV抗体确认试验不确定结果 P24 ：非特异性反应（孕妇，正常人） Gp160：非特异性反应，感染早期，感染晚期 Gp160，gp120：非特异性反应，感染早期，感染晚期 Gp160，p24：非特异性反应，感染早期，感染晚期 Gp160，gp120，p24：感染早期，感染晚期 污染？ 筛查试验阳性反应样品 HIV抗体确证检测流程图 结合流行病学资料，可以在4周后随访检测，如带型没有进展或呈阴性反应， 则报告阴性；如随访期间出现阳性反应，则报告阳性；如随访期间带型有进 展，但不满足阳性标准，应继续随访到8周。如带型没有进展或呈阴性反应 则报告阴性；满足HIV抗体阳性诊断标准则报告阳性，不满足阳性判断标准 可视情况决定是否继续随访。 确证试剂 根据具体情况进一步 检测HIV-2 报告阴性 出现HIV-2指示条带 阴性反应 不确定反应 报告HIV-1 阳性 HIV-1 阳性反应 HIV抗体检测的要点 1、根据目的选择检测方法及检测策略。 2、严格遵守实验室SOP。 3、筛查试验阳性，须作确证实验。 4、筛查试验阴性，不应做确证实验。 5、