中平树中东莨菪内酯的分离鉴定及含量测定.doc

中平树中东蒐若内酯的分离鉴定及含量测定 摘要：采用硅胶柱色谱分离纯化的方法从屮平树［Macaranga denticulata (Bl. ) Muel 1?Arg.］中分离得到一种香豆素类化合物，根 据理化性质及光谱数据鉴定其为东罠若内酯。并采用ZORBAX Eclipse XDB-C18 色谱柱(250 mmX4. 6 mm, 5 um),以甲醇：0. 1%冰醋酸(39 : 61)为流动相，流速1.0 mL/min,检测波长345 nm的色谱条件，用HPLC 法测左屮平树屮东萇若内酯的含量。结果表明，东萇若内酯在1.45-7. 24 Pg/mL范围内与其峰面积呈良好的线性关系，平均回收率为99.18%, RSD 为1.18% (n=6)o该方法简便、准确、快速，可用于中平树药材的质量控 制。 关键词：屮平树［Macaranga denticulata (Bl. ) Muell? Arg.］； 东萇若内酯；分离纯化；高效液相色谱法 中图分类号：R284. 1文献标识码：A文章编号：0439-8114 (2016) 18-4805-03 D0I： 10. 14088/j. cnki. issn0439-8114. 2016. 18. 044 屮平树［Macaranga denticulata (Bl. ) Muell? Arg.］为大戟科血桐 属植物，乂名血桐、糠皮树、赖麻、牢麻等，分布于广东、广西、贵州、 云南、西藏等地。其根味苦，性凉。具有清热利湿、退黄的功能，主治黄 疸型肝炎，胃皖疼痛［1］。广西民间主要用其根部治疗黄疸性肝炎方面的 疾病［2］,应用前景广阔。为探明中平树根的化学物质基础，本试验从中 平树药材中分离鉴定得到了东萇君内酯，并采用高效液相色谱法对其含量 进行了测定，该方法可用于中平树药材的质量控制。 1材料与方法 1.1材料与试剂 中平树采自广西马上县，山广西中医药研究院何开家主任中药师鉴定 为中平树。东萇君内酯对照品为从中平树中提取分离获得，经结构鉴定并 采用HPLC归一化法测得含量大于98%后使用；甲醇为色谱纯；水为去离子 水；其余试剂为分析纯。 1.2仪器 IR-470型红外光谱仪、LC-10AT型高效液相色谱仪、威玛龙色谱工作 站、AUW220D型分析天平、AEL-200型分析天平（口本岛津公司）,DRX-500MlIz 型超导核磁共振仪（瑞士布鲁克公司），ZDM-83-1型电热熔点仪（江苏科 教玻璃仪器厂），KQ-500DB型数控超声波清洗器（昆明市超声仪器冇限公 司），HH-S2型数显恒温水浴锅（金坛市医疗仪器厂），SHB-ITI型循环水 式多用真空泵（郑州长城科工贸有限公司）。 1. 3方法 1.3. 1提取分离中平树粉碎成粗粉，称取12 kg,加8倍体积95%乙 醇浸泡过夜后加热回流提取4次，每次2h,合并提取液，减压回收乙醇, 得浸膏。浸膏加入海沙使其分散均匀，依次用石油瞇（60?90 °C）、乙酸 乙酯回流提取，回收溶剂后分别得到右油醴部位及乙酸乙酯部位。取乙酸 乙酯部位进行硅胶柱色谱分离，用石油瞇（60-90 °C）—乙酸乙酯混合 溶剂（100 : 0-70 : 30）梯度洗脱，共收集265个流分。采用薄层鉴别将 各流份分别合并，将第150流份到第183流份合并，反复柱层析及重结晶 得到黄色针状结晶。 1.3.2对照品溶液的制备 精密称取东萇若内酯对照品3.62 mg置于 250 mL量瓶，用甲醇溶解并定容至刻度，摇匀，得浓度为14.48 u g/mL 的对照品储备液，备用。精密量取14. 48 ug/mL的对照品储备液3.0 mL 置于10讥量瓶中，用甲醇稀释至刻度，摇匀，即得浓度为4. 34 ug/mL 的对?照品溶液。 1.3.3供试品溶液的制备 精密称定中平树药材粉末(过40目筛)2.0 g,置烧瓶中，精密加入70%乙醇50 mL,称定重量，加热回流lh,放冷, 再称定重量，用70%乙醇补足减失的重量，摇匀，滤过。精密量取续滤液 25 mL,置烧瓶中，浓缩至约1 mL,加3 mol/L盐酸溶液10 mL,水浴中 加热水解1 h,立即冷却，移入分液漏斗中，用水10 mL洗涤容器，并入 分液漏斗屮，用氯仿强力振摇5次，每次15 mL,合并氯仿液，立即加甲 醇使溶解，转移至10汕量瓶中，并稀释至刻度，摇匀，即得。 1.3.4 色谱条件 釆用 ZORBAX Eclipse XDB-C18 色谱柱(250 minX4. 6 mm,5 um),流动相为甲醇:0. 1%冰醋酸水溶液(39 : 61),流速1.0mL/min, 柱温为室温，检测波长345 nmo分别精密吸取东萇着内酯対照品、供试品 和空白溶液各10 PL,进样分析，记录色谱图(图1、图2)。理论塔板数 按东萇若内酯计算应不低于3