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实验细菌的染色
细菌的单染色法 细菌的革兰氏染色
芽抱染色 荚膜的染色
实验目的
1、学习微生物涂片、染色的基本技术,掌握细菌 的简单染也法?
厶初步认识细菌的形态特征。
3、 学习细菌的革兰氏染色原理和方法
4、 了解细菌的特殊形态结构:
芽抱、荚膜的染色
5、 学习训练无菌操作技术?
1细菌的简单染色
实細理
细菌细胞微小,透明,不易观察,需染上濒色? 简单染色是利用单一染料对细菌进行染色的一 种方法,适用于菌体一般形状和细菌排列的观察?
为在中性、械常用碱性染料进行简单染色,
为在中性、械
性或弱酸性溶液中,细菌细胞通常带负电荷” W 碱性染料在电离时,其分子的染色部分带正电蒂” 因此诚性染料的染色部分很容易与细菌结合使细 菌着色经染色后的细菌细胞与背景形成鲜瞬的 对比在显微镜下更易于识别?
鸟覚塑作简单染色的染料有J
鸟覚塑作简单染色的染料有J美藍、结晶紫、碱性
复红等.
红等酸性染料染色9 衆
实酬料
1、菌种
金黄色葡萄球菌24h培养物
2、染色剂
吕氏孩性美童染液 齐氏石碳酸复红染液
操作步骤
操作步骤
染色 镜检
染色 镜检
无菌操作
涂片1
涂片1
干燥1
定1
水洗1
1
干
燥1
操作步
操作步H (continued)
1、涂片
取两块载玻片.各滴一小滴(或用接种环沾]IO 生理盐水(或无菌水)于玻片中央,用接种环以无 菌操作从枯草杆菌(Id)斜面上挑取少许菌苔于水 滴中,混合并涂成薄膜.
如用菌悬液或液体培养物,可用接种环挑瞰卜
2环直接涂于载玻片上?
Notes: 1)
Notes: 1)载玻片要洁净无油迹
2)滴生理盐水
和取菌不宜过多 3)涂片要涂抹均匀,不宜过厚.
操作步骤(continued)
操作步
操作步 91 (continued)
2、干燥室温自然干燥
3、固定
固定的目的:1Y1
固定的目的:
1Y1
1)使细胞质凄固》以固定细胞形态*
2)并使菌体牢固地附着在载玻片上.
固定方法: 热固定:涂面朝上》通过火焰数次 注意:温度不宜过高,以玻片背面不烫手为宜” 否则会改变甚至破坏细胞形态
操作步骤
操作步骤(continued)
染色
?将玻片平放于玻片搁架上,滴加染液于涂片上
(染液刚好覆盖涂片薄膜为宜)
(染液刚好覆盖涂片薄膜为宜)
? 美蓝染色卜2min:石碳酸复虹染色釣lmin.
5、水洗
倒去染液.用洗瓶(内装自来水)轻轻冲洗直至涂 片上流下来的水无色为止;染色废液收集在废液缸中.
Note: 水洗时》不要直接冲洗涂面,而应使水从载
玻片的一端流下*水流不宜过急,以免涂片薄膜脱落?
6、干燥
自然干燥或用电吹风吹干也可用吸水紙吸干?
7、镜检
细菌个体微小,一般使用油镜观察细菌个体影态.
7、镜检
7、镜检(continued)
操作步骤(continued)
Notes:
1) 必须等涂片完全干后才可滴加香柏油
2) 油镜使用完毕,切记按规定步骤擦干净. 否则可能损害镜头
「苯涸在另一片擦镜紙上,擦拭镜头:C)再用 一小片擦镜纸擦去镜头上可能残留的二甲苯?
2、革兰氏染色
“单染色法,只能观察微生物的大步、形状、 和细胞排列状况”但不能鉴别微生物以及 它的特殊构造等?
,复染色法:用两种或两种以上染色液进行 染色,有协助鉴别微生物的作用,故也称 鉴别染色法?常用的有:
革兰氏染色法、抗酸染色法、芽抱染色法、 荚膜染色法等?
3)
3)酒精脱色; 4)番红复染
革兰氏染色(Gram stain)
1984年,丹麦医生Gram釆用革兰氏染色法细
菌细胞壁区分为两种类型:革兰氏阴性(G+)
和革兰氏阳性(G-) 革兰氏染色步骤:
1)结晶紫初染;2)碘液媒染;
实验原理
G-
周质空间外堆层
周质空间
外堆层
外酸萤白
——j!fi3 n —基质蚤白
或孔爱白
O特异侧樋
-磷购 丿
-肽蘿樽(内弟凰) 一周质空间
f细胞脱
图2柑隼兰氏阳性细岡和垠兰氏阴性细菌细杷蜃构遭的比较
G +菌:细胞壁厚,肽聚糖网 状分子形成一种透性屏障,当 乙醇脱色时,肽聚糖脱水而孔 障缩小,故保留结晶紫-碘复 合物在细胞膜上。呈紫色。
G —菌:肽聚糖层薄,交联松 散,乙醇脱色不能使其结构收 缩,其脂含量高,乙醇将脂溶 解,缝隙加大,结晶紫-碘复 合物溶出细胞壁,番红复染后 呈红色。
细菌的特殊形态结构
2芽抱:休眠体,不利环境下产生,耐受各 种极端环境.
荚膜:多糖,包裹在菌体外围,保护菌体
实验材料
枯草芽抱“大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、 杆菌(2d)、胶质芽胞杆菌
枯草芽抱
,革兰氏染色液一套
,绘图、 写实验报告
,绘图、 写实验报告
实验步骤
革兰氏染色
枯草杆菌的芽抱染色 荚膜的染色
革兰氏染色的步骤
L涂片
2、初染:在做好的涂面上滴加草 酸锻结晶紫染液,染1分钟,倾 去染液
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