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血小板活化与流式细胞仪分析
血小板活化
?使用流式细胞仪,同时分析血小板多个活化 指标,灵敏、蒋异地舷测全血中的血小板, 了解血小板的反应性和活化进程
?血小板表面膜糖蛋白(GP) . PAC-1
?颗粒膜GP的表达量变化蛊CD62P
?直接使用全血,样本更接近生理状况
?操作步骤简便、用血量少、避免体外活化与 血小板亚群丢失
e血小板减少患者也能精确分析
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制作:姚新生审校:孙万邦联条yxspah@;0852-8204419弋少口 V
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牛血小板活化的三色荧光分析
?使用PerCP标记的泛血小板抗体CD61,特异 地测血小板表面的活化指标,避免碎片等非 特异干扰
?选择活化血小板特异的表面标记PACJ, CD62P,检测血小板活化的不同阶段
SPAC-1FITC; IgM型抗体,是血小板活化的早期 标志,即活化的血小板膜糖蛋白复合物。
? CD62P PE: IgGl型抗体,是血小板活化后颗粒 释放的标志
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血小板体外活化
?血小板激活剂:ADP,活化终浓度
0.2uM
?试管内加入50ulADP, 450ul抗凝全血 ?轻轻混匀
? 37吃温育5分钟
?立即进行染色
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制作:姚新生审校:孙万邦 联系:
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荧光染色
?Falcon管顺序编号,阴性对照为正常人 未活化标本,阳性对照为正常人活化标
?每一标本作2管:对照管和试验管 ?加入相应BDIS抗体及对照各10ul
PerCPCD61CD61BDIS 抗体 FITC PE 对照管 PAC-1+RGDS IgGl
PerCP
CD61
CD61
荧光染色
?对照管和实验管中各加入血标本5ul ?轻轻混匀,室温暗处孵育20分钟
?各管中分别加入2?8 °C 1%多聚甲醛lml, 充分混匀,于2-8 °C暗处固定10分钟
?24小时内上机,获取数据,分析结果
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:式■专流式细胞仪测定研究生免疫学POWERPOINT
:式
■专
流式细胞仪测定
研究生免疫学POWERPOINT讲稿
?检查鞘液筒和废液筒,打开流式细胞仪
?做FACSComp,校正仪器
?打开CELLQuest软件,顺序摆放试验管
?调出获取条件,FSC和SSC选择Log模式, FSC-SSC点图中出现血小板细胞群
? FL3设阈值,获取条件为CD61阳性
?在FL1-FL2点图中,‘对照管目标细胞群位于左 下脚
?获取对照管及试验管的数据
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流式细胞仪分析
? CD61 vs SSC点图中设门,找到CD61阳 性的血小板群
?门内做PAC-1 vs CD62P点图,进行双参 数分析
?结果统计就 PAC-1+, PACJ+CD62+, CD62+ %PLT
流式细胞仪测定
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