姬松茸多糖的降脂作用及其机制研究.pdf

摘 要 目的：探讨姬松茸多糖对高脂血症大鼠的血脂代谢的影响，及油酸诱导HepG2 细胞脂质 堆积细胞模型的作用，阐明姬松茸多糖在体内、体外降脂作用及其机制。 方法：采用水提醇沉及色谱层析方法提取分离纯化分子量均一的姬松茸酸性多糖；通过高 脂肪饮食建立高脂血症大鼠模型，将大鼠随机分为正常对照组(Normalcontrol group，NG)、 模型组 （Modelgroup，MG）、阳性药组 （Positivedruggroup，PD，4.8mg/kg/d）、姬松 茸酸性多糖组 （WABM-A，640mg/kg/d）于实验第9w，采用乌拉坦对大鼠进行麻醉，腹 主动脉取血，收集脾脏、肝脏、胰腺组织。分别测定大鼠脏器指数；检测血清生化指标； HE 染色观察大鼠肝脏病理形态变化；Westernblot 检测PPARγ、LXRα、ABCA1、ABCG1 蛋白表达；收集直肠粪便提取肠道微生态菌群DNA，利用16SrDNA 高通量测序，获得肠 道菌群大数据，进行多样性分析，通过生物分类学比较来进行组间菌群差异分析；采用油 酸诱导HepG2 细胞脂肪变性，建立脂滴堆积细胞模型，分为6组，正常对照组(Normal controlgroup，NG)、模型组 （Modelgroup，MG）、阳性药 （Positivedruggroup，PD，0.4 ug/mL）、姬松茸酸性多糖b 级分低剂量组 （WABM-A-b-L，2.5ug/mL）、姬松茸酸性多 糖b 级分中剂量组 （WABM-A-b-M，5ug/mL）、姬松茸酸性多糖b 级分高剂量组 （WABM-A-b-H，10ug/mL），油红O 染色观察WABM-A-b 对HepG2 细胞的影响；检测 HepG2 细胞内脂质含量；Westernblot 检测HepG2 细胞中PPARγ、LXRα、ABCA1、ABCG1 的蛋白表达水平。 结果：姬松茸酸性多糖 （WABM-A）通过分离纯化获得WABM-A-b 级分，主要由Glc （95.1%），GlcA （3.7%），Gal （0.9%），Xyl （0.2%）和Fuc （0.1%）组成，其分子量 为10kD，结构是以-6-β-D-Glcp-1-为主链的葡聚糖。体内实验结果显示，与MG 组相比， WABM-A 组大鼠体重增长降低 （p 0.05），脏器指数显著降低 （p 0.05或p 0.01）； 与MG 组相比，WABM-A 组大鼠血清中总胆固醇 （Total Cholesterol，TC）、甘油三酯 （Triglyceride，TG）、低密度脂蛋白胆固醇 （low density lipoprotein cholesteros，LDL-C） 含量显著降低 （p 0.01），而高密度脂蛋白胆固醇 （high density lipoprotein cholesterol， HDL-C）含量显著升高 （p 0.01）；与MG 组相比，WABM-A 组大鼠肝脏的总抗氧化能 力 （Total antioxidant capacity，T-AOC）、超氧化物歧化酶 （SuperoxideDismutase，SOD）、 谷胱甘肽过氧化物酶 （Glutathioneperoxidase，GSH-Px）、过氧化物酶 （Catalase，CAT）、 I 一氧化氮合酶 （Nitricoxide synthase，NOS）活性显著升高 （p 0.05或p 0.01），丙二 醛 （Malondialdehyde，MDA）活性显著降低 （p 0.01）；与MG 组相比，WABM-A 组大 鼠肝小叶中肝细胞脂肪变性明显改善；WABM-A 组可明显上调PPARγ、LXRα、ABCA1、 ABCG1蛋白的表达 （p 0.05）。在 OTU 水平上差异比较、Alpha 多样性分析显示，MG 组在给予高脂饲料后肠内容物微生物群多样性显著低于WABM-A 组和NG 组；Beta 多样 性分析显示，MG 组与WABM-A 相关性较强；生物分类学上的比较分析显示，在门水平 上，MG 组与WABM-A 组的厚壁菌门 （Firmicutes）/拟杆菌门 （Bacteroidetes）的比率从 27.12 降至8.03 （p 0.05）；与MG 组相比，WABM-A 组中螺旋体门 （Spirochaetes） （p 0.01）、放线菌门 （Actinobacteria）（p 0.05）、迷踪菌门 （Elusimicrobia）（p 0.05）