【临床血液学-实验课课件】_实验六 抗人球，异丙醇.ppt

异丙醇沉淀试验抗人球蛋白试验 抗人球蛋白试验 阳性→免疫性溶血 阴性→凝聚胺试验阳性→同种免疫 溶血、溶血性输血反应 冷热溶血试验阳性→感染,如先天梅毒 抗人球蛋白 IgG不完全抗体 RBC Coombs Test 步骤 1ml抗凝血于试管中，3000rpm/min，离心10分钟，弃去血浆层 等量生理盐水洗涤红细胞，3000rpm/min，离心10分钟，弃去上清，重复3次，第三次完全弃去生理盐水 用生理盐水配制3%-5%的红细胞悬液:1ml的NS+40ul的红细胞悬液 测定管加两滴RBC悬液+两滴coomb’s试剂，对照管加两滴RBC悬液+两滴生理盐水，1000rpm/min离心2分钟后，镜检看有无凝集 Coomb’s +:IHA,HDN -:Ham test +:PNH -:脆性 HS,HE N Hb电泳 MHb-RT N G-6-PD缺乏 PK PK缺乏 HbC HbH,HbBarts HbF,HbA2 HbS hemolysis 异丙醇沉淀试验原理 异丙醇为非极性溶剂，可降低Hb分子内部氢键 不稳定Hb稳定性下降，在异丙醇中更快沉淀 操作步骤 取17%的异丙醇液1ml加入试管中37℃预温10分钟 加入0.1ml的Hb液，混匀，计时 37℃水浴 5min，10min，15min，20min分别观察 5min出现浑浊， 20min内出现大块沉淀为强阳性。 注意事项 异丙醇浓度及温度应严格控制，pH値不得低于7.2，预热温度不足可致假阳性。 Hb浓度应控制在10%，过低会形成假阴性。 Hb液需要新鲜配制，久置可导致假阳性。 HbF含量过高可产生假阳性。