【医院科室学习-神经生物学】_脑立体定位和切片技术.ppt

Techniques in Neurobiology State Key Lab of Medical Neurobiology * （１）MFB的DA能神经纤维相对集中，相对小剂量的6-OHDA注入MFB能造成更多的DA能神经元死亡 （2）MFB同时也是VTA的DA能神经纤维投射通路之一，以MFB为毁损靶点可同时毁损VTA的DA能神经无，而VTA对黑质—纹状体系统对运动的调节存在重要影响。 （3）apomorphine：阿普吗啡 （4）contralateral：对侧的 （5）ipsilateral：身体的同侧的,同侧的 （6）amphetamine：苯丙胺 （7）黑质致密部（SNc） 中脑腹侧被盖（VTA）， 经阿朴吗啡（APO）诱导表现为恒定左侧旋转且旋转圈数大于210 r/30 min，视为成功PD大鼠模型。 （8）SNc：前囟后(5.0±0.1)mm，矢状缝右侧(1.5±0.1)mm，硬脑膜下(7.8±0.1) mm； VTA：前囟后(4.6±0.1)mm，中线右侧(0.9±0.1)mm，硬脑膜 下(7.3±0.1)mm。 (9) AP anteroposterior 前囟前后 AP +是前囟前 ML mediolateral 中逢左右 DV dorsoventral 颅骨（硬脑膜）平面向下 (10) AP代表前囟，“＋”前囟前，“－”为前囟后；R或L代表左或右；DV或H代表深度。在包新明的图谱上（或Paxinos Watson图谱，均以前囟和人字缝尖为基准平面），海马CA1区颗粒细胞层（最常用的部位）的坐标为：AP：－4.0~－5.2mm；R或L：2mm；DV或H：2.5mm（皮层表面开始计）。零点就是在颅骨表面。  Interaural:耳间的 Bregma：冠矢点,前囟点 * * 脑立体定位和切片技术 脑立体定位技术 脑立体定位技术的简单流程 动物脑立体定位：利用颅骨的标志/参考点，确定皮层下某些神经结构的位置，利用脑立体定位仪对脑进行定向的刺激、破坏、药物注射、引导电位等研究的技术。 主要用途：对神经结构进行定向的： 注射（给药） 埋管（慢性给药，透析） 损毁 记录（电生理） 前囟（Bregma）：位于冠状缝和矢状缝的交界处 人字缝尖（lambda）：位于后囟人字缝与矢状缝的交汇点 Bregma, 前囟 动物脑立体定位：利用颅骨的标志/参考点，确定皮层下某些神经结构的位置，利用脑立体定位仪对脑进行定向的刺激、破坏、药物注射、引导电位等研究的技术。 主要用途：对神经结构进行定向的 注射（给药） 埋管（慢性给药，透析） 损毁 记录（电生理） Kopf 900 Stereotaxic Kopf 1404 Frame Assembly 立体定位仪： Stereotaxic Drill Unit Adjustable Wire Knife Kopf 5000 Microinjection Unit 立体定位仪： 游标卡尺原理 根据游标上的分度格数，常把游标卡尺分为10分度、20分度、50分度。 尺身上的最小分度是1毫米，游标尺上有10个小的等分刻度，总长9毫米，每一分度为0.9毫米，比主尺上的最小分度相差0.1毫米。尺身和游标的零刻度线对齐，它们的第一条刻度线相差0.1毫米。 立体定位仪中坐标的读取 主尺 游标尺 游标卡尺按下列规则读数： （1）以游标零刻线位置为准，在主尺上读取整毫米数。 （2）看游标上哪条刻线与主尺上的某一刻线（不用管是第几 条刻线）对齐，由游标上读出毫米以下的小数。 （3）总的读数为毫米整数加上毫米小数。 研究实例 MFB: (1) AP: -4.4 mm, ML: 1.2 mm, V: -7.8 mm; (2)AP: -4.0 mm, ML: 0.8 mm, V: -8.0 mm 内侧前脑束（MFB）:从基底嗅区、旁杏仁核区和隔核出发投射至下丘脑侧部的一组复杂纤维。MFB的DA能神经纤维相对集中，相对小剂量的6-OHDA注入MFB能造成更多的DA能神经元死亡。 [器材和药品] 立体定位仪、10％水合氯醛麻醉剂、1ml注射器、手术刀、组织剪、止血钳、牙科钻或骨钻、金属定位针、脱脂棉花、3%双氧水（H2O2）、缝针与缝线、75%酒精 [实验动物] 雄性SD大鼠 ，体重约 200-300 g 实 验 准 备 [操作步骤] 1. 立体定位仪的一般校验 2. 动物麻醉：动物称重后，水合氯醛溶液按3.6ml/kg作腹腔注射麻醉。 3.?头部固定： （1）插入耳棒: 先将一侧耳棒