一株桑椹核盘菌的分离鉴定及其植物源抑菌剂的筛选.pdf

摘要 摘要 菌核病作为影响桑果产量的第一大病害，在全国的果桑种植基地均有发生。陕西 省内果桑种植范围广泛，每年产出的桑果可以给果农带来了巨大的经济收益。但桑果 产量受菌核病影响极大，一旦防治不当，会使其减产甚至绝收。一般认为桑椹菌核病 病原有菌桑实杯盘菌，肉阜状杯盘菌和核地杖菌，也有研究称核盘菌能造成桑椹菌核 病。为了对陕西省桑椹菌核病的病原进行深入研究，为后续桑椹菌核病的生物防治奠 定基础。本研究采集了桑椹开花时期大田生长的具有核盘菌子实体特征的子实体，采 用组织分离法从子实体分离和纯化出对应的菌株，对子实体表型，以及从中分离纯化 的菌株进行形态学观察，然后进行分子生物学方法鉴定，两者结合最终确定菌株的种 属。采用生长速率法研究分离菌株的生物学特征，采用平皿法和活体接种法确定其致 病性，并在实验室筛选该病原菌的植物源抑菌剂，获得的主要结果如下： 1. 利用常规组织块分离法对在周至县桑园采集的子实体进行分离与纯化，共分离 得到两个纯化的菌株，形态学和分子生物学分析结果表明，两个菌株分别为灰霉菌和 核盘菌。本研究选择核盘菌作为后续试验的供试菌株。 2. 供试核盘菌的生物学特性研究结果表明：该菌在pH 值为3 的环境下生长最好； 15℃时有利于该菌生长，在4 ℃的条件下也能正常凝结菌核；不同碳源中以果糖、葡萄 糖的利用效果最好，利用效果最差的是淀粉；不同氮源中最适为酵母粉，利用效率最 差的是尿素。 3.平皿法接种桑树叶片结果显示，供试核盘菌能够导致叶片腐烂，并产生白色菌丝， 菌丝重分离鉴定确证为供试核盘菌。以供试菌株对拟南芥与烟草进行活体接种，在接 种 24h 后，菌饼覆盖叶片位置均产生腐烂现象并长出大量白色菌丝重分离鉴定后确认 为供试核盘菌。以供试菌的菌丝和孢子悬浮液进行大田桑树雌花侵染试验，但未成功。 4.选用文献报道的具有抑菌活性的 18 种药用植物，以其60%醇提液为供试液，采 用生长速率法测定不同植物来源的供试液对供试核盘菌的抑制作用。结果表明，在 18 种供试植物中，0.1g/mL 植物干粉的提取液抑菌率超过50%的有两种，分别为八角茴香 (97.21%)和厚朴(58.10%) 。对八角茴香进行更低浓度的抑菌试验，结果显示 0.09g/mL 植物粗提时，抑菌率为92.99%；0.08g/mL 为63.84%；0.07g/mL 为43.37% 。对八角茴 香粗提取物使用水、甲苯和乙酸乙酯进行萃取分离后各部分分别抑菌试验，结果显示 抑菌率分别为水（89.72% ），甲苯（72.18% ），乙酸乙酯（36.67% ）。 关键词：桑椹核盘菌，分离鉴定，生物学特性，植物源抑菌剂 I 目录 目 录 第一章 文献综述 1 1.1 引言 1 1.2 国内外研究进展 2 1.2.1 桑椹菌核病病原菌 2 1.2.2 植物真菌分离鉴定研究进展 5 1.2.3 菌核病的防治 7 1.2.4 植物源抑菌剂的研究进展 9 1.2.5 技术路线 10 第二章 桑椹菌核病病原菌的分离培养与鉴定 11 2.1 引言 11 2.2 材料与方法 11 2.2.1 试验材料 11 2.2.2 试验方法 11 2.3 试验结果 12 2.3.1 形态观察 12 2.3.2 分离菌株Z02 的分子生物学鉴定 14 2.3.3 致病性检测 15 2.4 小结与讨论 16 第三章 桑椹核盘菌的生物学特性研究 18 3.1 引言 18 3.2 材料与方法 18 3.2.1 供试菌株 18 3.2.2 培养基 18