γδT细胞介导乳腺抗金黄色葡萄球菌感染免疫机制的研究.pdf

摘 要 摘 要 乳房炎是一种由乳房内病原菌感染引起的乳房炎症性疾病，包括临床乳房炎和亚 临床乳房炎 （或称隐性乳房炎），是制约我国乃至全世界奶牛和奶山羊养殖业发展的重 要疾病之一。患病个体泌乳量以及泌乳质量严重下降，甚至会对幼畜的健康造成很大 的影响，经济损失每年都高达数亿元。 作为机体屏障系统的重要组成部分，乳腺内具有丰富数量的γδT 细胞。γδT 细胞作 为固有免疫系统的重要组成部分，活化后主要产生两种类型的效应细胞因子--IFN-γ 和 IL-17，均密切参与机体的抗感染免疫。但是γδT 细胞具体以何种方式在乳腺抗病原菌 感染免疫中发挥作用，乳腺γδT 细胞活化的调节机制等，尚无研究报道。 + 本研究采集患有乳房炎的奶山羊乳汁，使用定量PCR 的方法对IL-17 γδT 细胞趋 化诱导和中性粒细胞迁移相关的细胞因子进行检测；使用以金黄色葡萄球菌和IL-17 刺 激体外培养的奶山羊乳腺上皮细胞，使用定量PCR 的方法对γδT 细胞趋化和中性粒细 胞迁移相关的细胞因子进行定量检测；以S. aureus 乳腺炎小鼠为模型，分别采用流式 细胞术和real-time PCR 技术对γδT 细胞在乳腺抗S. aureus 感染中的角色进行研究，探 讨γδT 细胞参与乳腺抗病原菌感染免疫的方式。获得研究结果如下： 1. 患乳房炎奶山羊乳汁中IL-17、IL-23 、IL-1β 与TGF-β 的mRNA 水平都表现出 显著升高 （P 0.05 ）;γδT 细胞趋化因子（CCL2 ）及其受体（CCR2 ）的mRNA 相对表 达量也显著上升 （P 0.0 1）。 2. S. aureus 刺激后，乳腺上皮细胞的CCL2 ）的表达水平在mRNA 和蛋白质分子 水平均显著升高（P 0.001 ）；S. aureus 与IL-17 可以更显著的促进乳腺上皮细胞IL-8、 CXCL6 与CCL4 在mRNA 水平高表达 （P 0.0 1）。 + 3. 乳腺炎小鼠乳腺中IL-17 γδT 细胞占淋巴细胞数量的比例显著升高（P 0.001 ）； Il1b 、Il6 和Il17 mRNA 水平显著增加（P 0.05 ）；Il23 和Tgfb mRNA 水平变化差异不 显著（P 0.05 ）。 4. 乳腺炎小鼠乳腺中γδT 细胞与中性粒细胞趋化因子检测结果显示：Ccr2 和Ccl2 mRNA 水平显著增加（P 0.05 ）；中性粒细胞趋化因子Ccl4 和Cxcl6 mRNA 水平显著 增加（P 0.05 ）；与中性粒细胞活化相关的Cxcr4 mRNA 水平显著增加（P 0.05 ）。 5. 乳腺炎小鼠乳腺中与 M2 型巨噬细胞相关的Ym-1、Cd206, Arginase-1、Fizz-1 与IL10 分子的mRNA 表达量皆显著上升 （P 0.05 ）。 6. 患乳房炎奶山羊乳汁中与M2 型巨噬细胞相关的细胞因子Cd206、Arginase-1 与 IL10 的mRNA 表达量皆显著上升 （P 0.05 ）。 I 西北农林科技大学硕士学位论文 结论： + 1. 患乳房炎奶山羊的乳腺具有适宜IL-17 γδT 细胞活化的局部细胞因子微环境。 2. S. aureus 和IL-17 可以在体外刺激乳腺上皮细胞分泌γδT 细胞和中性粒细胞趋 化因子。 + 3. 天然免疫应答阶段，介导乳腺炎的IL-17 来自乳腺中的IL-17 γδT 细胞。 + 4. 乳腺中IL-17 γδT 细胞的百分比显著上升，而脾脏中γδT 细胞百分比无显著变 化。 5. M2 型巨噬细胞分泌IL-10 负调控