沙门氏菌检验方法学验证报告.doc

PAGE 3 GB4789.4-2016沙门氏菌检验方法学验证报告 验证目的 验证《食品安全国家标准 食品微生物学检验沙门氏菌检验GB 4789.4-2016》沙门氏菌检验在本实验室的适用性。 二、验证方法 样品采样方案依据GB4789.1-2010《食品微生物学检验 总则》的要求进行，本实验取三个不同的典型样品进行实验，严格按照GB4789.4-2016进行。 表1:实验方法设计表 样品种类 样品名称 样品编号 实验人员 实验方法 蜜饯制品 xxx xxx a、b 双人双平行 熟肉制品 xxx xxx a、b 双人双平行 坚果制品 xxx xxx a、b 双人双平行 除上述实验程序外，为保证本次验证的科学性和准确性，本次实验添加阳性对照组，对照组由标准菌株伤寒沙门氏菌（CMCC(B)50071）接种培养而成，与样品实验程序同时进行。 三、验证设备和试剂 冰箱： SC-322 青岛海尔电器 生化培养箱：SPX-150B-Z 上海博迅实业 电位pH计：PHS-3C+（精确度0.01） 成都世纪方舟科技有限公司 恒温振荡器：SHA-A 江苏金坛环宇科学仪器厂 菌落计数仪：Scan-500 北京五洲东方科技发展有限公司 天平：JE-502 上海浦春计量仪器有限公司 培养基和试剂： 缓冲蛋白胨水( BPW ) 北京陆桥技术股份有限公司 四硫磺酸钠煌绿( TTB )增菌液 北京陆桥技术股份有限公司 亚硒酸盐胱氨酸( SC )增菌液 北京陆桥技术股份有限公司 亚硫酸铋( BS )琼脂 北京陆桥技术股份有限公司 沙门氏菌属显色培养基 北京陆桥技术股份有限公司 三糖铁( TSI )琼脂 北京陆桥技术股份有限公司 生化鉴定试剂盒 北京陆桥技术股份有限公司 沙门氏菌 O、H 和 Vi 诊断血清 宁波天润生物药业有限公司 四、验证环境 依据《消毒与灭菌效果的评价方法与标准GB15981-1995》定期对高压蒸汽灭菌锅的灭菌效果进行检测评价并记录； 依据《无菌室消毒灭菌操作规程》定期对对无菌室、生物安全柜进行清洁消毒灭菌并记录； 依据《实验室质量控制规范食品微生物检测GB/T27405-2008》定期对对无菌室及生物安全柜进行沉降菌检测并记录； 无菌室检验：详见《XXX》； 五、验证步骤 1操作步骤 1.1预增菌 无菌操作称取 25g ( mL )样品，置于盛有 225mLBPW 的无菌均质袋中，用拍击式均质器拍打1min~2min。若样品为液态，不需要均质，振荡混匀。如需调整pH ，用1mol/mL无菌NaOH或HCl调pH至6.8±0.2。使用均质袋直接进行培养，于 36℃±1℃培养 8h~18h。如为冷冻产品，应在45℃以下不超过15min，或2℃~5℃ 不超过18h解冻。 1.2增菌 轻轻摇动培养过的样品混合物，移取 1mL，转种于10mLTTB内，于42℃±1℃培养18h~24h 。同时另取1mL转种于10mLSC内，于36℃±1℃培养18h~24h 。 1.3分离 分别用直径3mm的接种环取增菌液1环，划线接种于一个BS琼脂平板和一个沙门氏菌属显色培养基平板，于36℃±1℃ 分别培养40h~48h (BS琼脂平板)或 18h~24h(沙门氏菌属显色培养基平板)，观察各个平板上生长的菌落，各个平板上的菌落特征见表2： 表2：沙门氏菌属在不同选择性琼脂平板上的菌落特征 选择性琼脂平板 沙门氏菌 BS琼脂 菌落为黑色有金属光泽、棕褐色或灰色，菌落周围培养基可呈黑色或棕色;有些菌株形成灰绿色的菌落，周围培养基不变 HE琼脂 蓝绿色或蓝色，多数菌落中心黑色或几乎全黑色;有些菌株为黄色，中心黑色或几乎全黑色 XLD 琼脂 菌落呈粉红色,带或不带黑色中心，有些菌株可呈现大的带光泽的黑色中心，或呈现全部黑色的菌落;有些菌株为黄色菌落,带或不带黑色中心 沙门氏菌属显色培养基 按照显色培养基的说明进行判定 1.4生化试验 1.4.1自选择性琼脂平板上分别挑取2个以上典型或可疑菌落，接种三糖铁琼脂，先在斜面划线，再于底层穿刺；接种针不要灭菌，直接接种赖氨酸脱羧酶试验培养基和营养琼脂平板，于36℃±1℃培养18h~