NY_T 4145-2022 动物源金黄色葡萄球菌分离与鉴定技术规程.docx

ICS 67.120.10 CCS X 22 中 华 人 民 共 和 国 农 业 行 业 标 准 NY/T 4145—2022 动物源金黄色葡萄球菌分离与鉴定 技术规程 Technical code of practice for isolation and identification of Staphylococcus aureus from animals 2022-07-11 发布 2022-10-01实施 中华人民共和国农业农村部发布 I NY/T 4145—2022 前 言 本文件按照GB/T 1.1—2020《标准化工作导则 第1部分：标准化文件的结构和起草规则》的规定 起草。 请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别专利的责任。 本文件由农业农村部畜牧兽医局提出。 本文件由全国兽药残留与耐药性控制专家委员会归口。 本文件起草单位：中国兽医药品监察所、辽宁省检验检测认证中心。 本文件主要起草人：宋立、李欣南、张纯萍、韩镌竹、赵琪、孙园媛、崔明全、邱月 1 NY/T 4145—2022 动物源金黄色葡萄球菌分离与鉴定技术规程 1 范围 本文件规定了动物源金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)的分离与鉴定方法。 本文件适用于动物生鲜乳、动物组织和上呼吸道拭子等样品中金黄色葡萄球菌的分离与鉴定。 2 规范性引用文件 下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用文件， 仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其必威体育精装版版本(包括所有的修改单)适用于本 文件。 GB/T 6682 分析实验室用水规格和试验方法 GB 19489 实验室 生物安全通用要求 3 术语和定义 本文件没有需要界定的术语和定义。 4 试剂或材料 4.1 要求 除另有规定外，所有试剂均为分析纯，水为符合GB/T 6682 规定的三级水，培养基按附录 A 配制或 用商品化产品。 4.2 试剂 4.2.1 过氧化氢溶液(30%)。 4.2.2 柠檬酸钠。 4.2.3 α氰-4-羟基肉桂酸(HCCA)。 4.2.4 氯化钠 4.2.5 甘油。 4.3 溶液配制 4.3.1 0.3%过氧化氢溶液：取过氧化氢溶液1mL、水100 mL, 现用现配。 4.3.2 柠檬酸钠溶液：取柠檬酸钠3.8g, 加水100mL, 溶解，过滤121℃高压灭菌15 min, 备用。 4.3.3 兔血浆溶液：取柠檬酸钠溶液、兔全血，按体积比1:4混匀，静置(或以3000 r/min 离心30 min), 使血液细胞下降，取上层清液，即得。 4.3.4 无菌盐水：取氯化钠4.5g, 溶于入1000mL 水中，121℃高压灭菌15 min。 4.3.5 基质溶液：取α氰-4-羟基肉桂酸(HCCA), 按说明书配制溶液；或用市售商品。 4.3.6 无菌生理盐水：取氯化钠8.5g, 溶于1000mL水中，121℃高压灭菌15 min。 4.3.7 灭菌甘油：取甘油适量，121℃灭菌20 min。 4.4 培养基制备 4.4.1 Cary-Blair 氏运输培养基：按照附录A 中 A.1 的规定执行。 4.4.2 7.5%氯化钠肉汤：按照A.2 的规定执行。 4.4.3 10%氯化钠胰酪胨大豆肉汤：按照A.3 的规定执行。 4.4.4 金黄色葡萄球菌显色培养基：按照说明书制备。 2 NY/T 4145—2022 4.4.5 营养琼脂：按照A.4 的规定执行。 4.4.6 脑心浸出液肉汤：按照A.5 的规定执行。 4.4.7 5%蔗糖脱脂乳保护剂：按照A.6 的规定执行。 4.5 标准菌株 金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus,ATCC29213,CMCC26003)。 4.6 材料 4.6.1 菌种冷冻保存管或磁珠保存管。 4.6.2 革兰氏阳性细菌鉴定卡(盒)。 5 仪器设备 5.1 恒温培养箱：(36±1)℃。 5.2冰箱：2℃~8℃,-20℃或以下。 5.3 恒温水浴锅。 5.4 分析天平：感量0.1 g. 5.5 二级生物安全柜。 5.6 高压灭菌器 5.7 显微镜：100×。 5.8 麦氏浊度仪或标准麦氏比浊管。 5.9 微生物生化鉴定系统。 5.10微生物质谱仪(MALDI-TOF MS)。 6 样品采集与保存运输 6.1 混合生鲜乳样品 灼烧储奶罐出料口，打开出料阀，弃去前段生鲜乳，接取10 mL～20mL 于无菌容器