NY_T 4144-2022 动物源细菌抗菌药物敏感性测试技术规程 纸片扩散法.docx

ICS 67.120.10 CCS X 22 NY 中 华 人 民 共 和 国 农 业 行 业 标 准 NY/T 4144—2022 动物源细菌抗菌药物敏感性测试技术 规程 纸片扩散法 Technical code of practice of antimicrobial susceptibility tests for bacteria isolated from animals—Disk diffusion method 2022-07-11 发布 2022-10-01实施 中华人民共和国农业农村部发布 I NY/T 4144—2022 前 言 本文件按照GB/T 1.1-2020《标准化工作导则 第1部分：标准化文件的结构和起草规则》的规定 起草。 请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别专利的责任 本文件由农业农村部畜牧兽医局提出。 本文件由全国兽药残留与耐药性控制专家委员会归口。 本文件起草单位：中国动物卫生与流行病学中心、中国兽医药品监察所。 本文件主要起草人：王娟、赵琪、曲志娜、张纯萍、刘俊辉、黄秀梅、宋立、李月华、刘娜、张青青、张喜悦 高玉斌、崔明全、王君玮、王鹤佳、徐士新。 NY/T 4144—2022 动物源细菌抗菌药物敏感性测试技术规程 纸片扩散法 1 范围 本文件规定了动物源细菌对抗菌药物敏感性测试纸片扩散法的操作步骤、结果判读、质量控制、记录 及生物安全措施等技术要求。 本文件适用于采用纸片扩散法测定抗菌药物对动物源细菌的抑菌圈大小。 2 规范性引用文件 下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用文件， 仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其必威体育精装版版本(包括所有的修改单)适用于本 文件。 GB/T 6682 分析实验室用水规格和实验方法 GB 19489 实验室 生物安全通用要求 3 术语和定义 下列术语和定义适用于本文件。 3.1 菌落形成单位 colony forming unit,CFU 在琼脂平板上经过一定温度和时间培养后形成的每一个菌落。 4 试剂或材料 4.1 要求 除另有规定外，所有试剂均为分析纯，水为符合 GB/T 6682 规定的三级水，培养基按附录 A 配制或 用商品化产品。 4.2 培养基制备 4.2.1阳离子调节Mueller-Hinton肉汤(CAMHB): 按照附录A 中 A.1 的规定执行。 4.2.2营养琼脂(NA): 按照A.2 的规定执行。 4.2.3 MH 琼脂：按照 A.3 的规定执行。 4.3 质控菌株 4.3.1大肠埃希菌(ATCC25922): 用作肠杆菌科、巴氏杆菌、放线杆菌的质控菌。 4.3.2 粪肠球菌(ATCC 29212):用作肠球菌属的质控菌。 4.3.3 金黄色葡萄球菌(ATCC 29213):用作葡萄球菌属、产气荚膜梭菌的质控菌。 4.3.4 肺炎克雷伯菌(ATCC 700603):用作克雷伯菌药敏试验的质控菌。 4.3.5 肺炎链球菌ATCC 49619:用作链球菌、巴氏杆菌的质控菌。 4.4 材料 4.4.1 抗菌药物纸片。 4.4.2 0.5麦氏单位(McFarland) 标准比浊液。 5 仪器设备 5.1 恒温培养箱、CO2 培养箱：(35±2)℃,(42±2)℃。 2 NY/T 4144—2022 5.2 二级生物安全柜。 5.3 分析天平：感量0.01 mg 和0.01 g。 5.4 比浊仪：精确度±0.10 MCF。 5.5冰箱：4℃、 -20℃。 5.6 药敏纸片分配器 5.7 游标卡尺：精度0.1 mm。 5.8 抑菌圈读取仪。 6 操作步骤 6.1 菌悬液的制备 a)、b)两种方法任选其一。 a) 直接菌悬液法：取质控菌、测试菌单菌落，分别置于无菌生理盐水或无菌CAMHB 中，用比浊仪 或0.5麦氏单位标准比浊液调菌液浓度至0.5麦氏单位(相当于1.0×10? CFU/mL～2.0×108 CFU/mL); b) 生长法：取质控菌、测试菌单菌落，分别置于加有4 mL～5mL 无菌CAMHB 的试管中，(35±2)℃ 培养3 h～5h。 取菌液，用无菌生理盐水或无菌CAMHB 调菌液浓度至0.5 麦氏单位(相当于 1.0×10°CFU/mL～2.0×10°CFU/mL)。 适用于菌落不易直接乳化而不能获得浓度均一菌悬液 的细菌。 注：工作菌恳液应在配置后15 min 内完成接种。 6.2 接种 用无菌棉拭子蘸取菌悬液(在管内壁挤压，去除多余液体),从上至下