NY_T 4146-2022 动物源沙门氏菌分离与鉴定技术规程.docx

ICS 67.120.10 CCS X 22 中 华 人 民 共 和 国 农 业 行 业 标 准 NY/T 4146—2022 动物源沙门氏菌分离与鉴定技术规程 Technical code of practice for isolation and identification of Salmonella from animals 2022-07-11 发布2 0 2 2 - 1 0 - 0 1 实 2022-07-11 发布 中华人民共和国农业农村部发布 I NY/T 4146—2022 前 言 本文件按照GB/T1.1—2020 《标准化工作导则 第1部分：标准化文件的结构和起草规则》的规定 起草。 请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别专利的责任。 本文件由农业农村部畜牧兽医局提出。 本文件由全国兽药残留与耐药性控制专家委员会归口。 本文件起草单位：中国兽医药品监察所、中国动物疫病预防控制中心。 本文件主要起草人：张纯萍、李颖、赵琪、叶子煜、宋立、刘洪斌、崔明全、蔡英华、徐士新、于娘、王鹤佳。 1 NY/T 4146—2022 动物源沙门氏菌分离与鉴定技术规程 1 范 围 本文件规定了动物源沙门氏菌(Salmonella) 的分离与鉴定方法。 本文件适用于动物直肠/泄殖腔拭子、新鲜粪便、肠道内容物等样品中沙门氏菌的分离和鉴定。 2 规范性引用文件 下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用文件， 仅注日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其必威体育精装版版本(包括所有的修改单)适用于本 文件。 GB4789.4—2016 食品安全国家标准 食品微生物学检验 沙门氏菌检验 GB/T 6682 分析实验室用水规格和试验方法 GB 19489 实 验 室 生物安全通用要求 3 术语和定义 本文件没有需要界定的术语和定义。 4 试剂或材料 4.1 要求 除另有规定外，所有试剂均为分析纯，水为符合 GB/T 6682 规定的三级水，培养基按附录 A 配制或 用商品化产品。 4.2 试剂 4.2.1 氯化钠 4.2.2 聚合酶链式反应预混液(2×PCR Master Mix)。 4.2.3 琼脂糖 4.2.4 α氰-4-羟基肉桂 酸(HCCA): 色谱纯。 4.2.5 50×TAE 缓冲液。 4.2.6 甘油， 4.3 溶液制备 4.3.1 无菌生理盐水：取氯化钠8.5g, 加水适量使溶解并稀释至1000mL,121℃ 高压灭菌15 min。 4.3.2 基质溶液：取α氰-4-羟基肉桂酸(HCCA), 按说明书配制或用市售商品。 4.3.3 灭菌甘油：取丙三醇适量，121℃高压灭菌20 min。 4.3.4 1×TAE 缓冲液：取50×TAE 缓 冲 液 2 0mL, 加水定容至1000mL。 4.3.5 1.2%琼脂糖凝胶：取琼脂糖1.2g, 于 1 0 0mL1×TAE 中加热，充分溶解。 4.4 培养基制备与缓冲溶液 4.4.1 Cary Blair 氏运送培养基：按照附录 A 中 A.1 的规定执行。 4.4.2 蛋白胨水缓冲液(BPW): 按 照A.2 的规定执行。 4.4.3 四硫磺酸钠煌绿(TTB) 增菌液：按照A.3 的规定执行。 4.4.4 亚硒酸盐胱氨酸(SC) 增菌液：按照A.4 的规定执行。 4.4.5 氯化镁孔雀绿(RV) 增菌液：按照A.5 的规定执行。 2 NY/T 4146—2022 4.4.6 营养琼脂：按照A.6 的规定执行。 4.4.7 沙门氏菌属显色培养基：按说明书制备。 4.4.8 5%蔗糖脱脂乳保护剂：按照 A.7 的规定执行。 4.5 标准菌株 肠炎沙门氏菌[Salmonella enteritidis,CMCC(B)50335]。 4.6材料 4.6.1 生化鉴定试剂盒或鉴定卡。 4.6.2 磁珠保藏管。 5 仪器设备 5.1 二级生物安全柜。 5.2 恒温培养箱。 5.3 冰箱：2℃~8℃,-20 ℃或以下。 5.4分析天平：感量0.1 g。 5.5 生物显微镜 5.6 pH 计或精密 pH 试纸。 5.7高速冷冻离心机：离心速度≥12000 r/min。 5.8 麦氏比浊仪。 5.9微生物生化鉴定系统。 5.10 PCR 仪。 5.11 核酸电泳仪：配水平电泳槽。 5.12 电泳凝胶成像分析系统。 5.13微生物质谱仪(MALDI-TOF MS)。 6