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流式细胞多色分析23-13536-00 Rev. 01第一页，共十页，2022年，8月28日 Multicolor Analysis StrategiesPlot typesHierarchical gatingPopulation hierarchiesBack gating223-13536-00 Rev. 01第二页，共十页，2022年，8月28日 Use Different Plot TypesHistograms—using histograms can help discriminate between two populations.Dot Plot: hard to discriminate populationsDot Plot: displaying fewer events improves discriminationHistogram: population boundary is evident 323-13536-00 Rev. 01第三页，共十页，2022年，8月28日 Use Different Plot TypesContour Plots—using contour plots can:Help locate population means.Indicate a need for biexponential scaling.Dot Plot: hard to see populations bunched on axisContour Plot: shows that biexponential display might be needed Biexponential Contour Plot: gives best display of populations 423-13536-00 Rev. 01第四页，共十页，2022年，8月28日 Hierarchical Gating523-13536-00 Rev. 01第五页，共十页，2022年，8月28日 Hierarchical GatingWhat went wrong here?Correct Hierarchy623-13536-00 Rev. 01第六页，共十页，2022年，8月28日 Back GatingResearcher wants to discriminate Tregs based on CD25 and CD127 expression.Need to ensure a gate includes the entire FOXP3+ population.723-13536-00 Rev. 01第七页，共十页，2022年，8月28日 Additional Analysis StrategiesBiexponential scalingEvents to displayHinged and offset quadrant gatesDerived (boolean) gatesSnap-to gatesStatisticsAnalysis templates823-13536-00 Rev. 01第八页，共十页，2022年，8月28日 ICS Data Analysis ResultsInformation that can be retrieved:Number of collected events, number of live CD3+ cells% of main populations: %CD3+, CD4+, CD8+% of na?ve (CD45RA+) and memory (CD45RA–) CD4+ and CD8+ cells% CD25+CD4+ cells (Tregs)For the cytokines: % of CD4+ and CD8+making 1 or 2 cytokinesAnalysis Exercise923-13536-00 Rev. 01第九页，共十页，2022年，8月28日 ICS Panel Analysis1023-13536-00 Rev. 01第十页，共十页，2022年，8月28日