SN_T 4624.2-2016入境环保用微生物菌剂检测方法 第2部分：短小芽孢杆菌.pdf

SN中华人民共和国出入境检验检疫行业标准SN/T 4624.2—2016入境环保用微生物菌剂检测方法第2部分：短小芽孢杆菌Methods for examination of import microbial blends inthe environmental protection-Part 2 :Bacillus pumilus2016-08-23 发布2017-03-01实施中华人民共和国发布国家质量监督检验检疫总局舌肆 中华人民共和国出人境检验检疫行业标准入境环保用微生物菌剂检测方法第2部分：短小芽孢杆菌SN/T 4624.2---2016*中国标准出版社出版北京市朝阳区和平里西街甲2号（100029)北京市西城区三里河北街16号（100045）总编室：（010址 中国标准出版社秦皇岛印刷厂印刷*开本880×12301/16印张 １字数 28千字2017年12月第一版2017年12月第一次印刷印数 1—500*书号：155066·2-32406 SN/T 4624.2—2016前創言SN/T4624《人境环保用微生物菌剂检测方法》共分为17部分：第1部分：地衣芽孢杆菌；-第2部分：短小芽孢杆菌；第3部分：巨大芽孢杆菌；-第4部分：嗜酸氧化亚铁硫杆菌；一第5部分：β型溶血性链球菌；第6 部分：金黄色葡萄球菌;一第7部分：沙门氏菌；一第8部分：志贺氏菌；第9部分：致泻大肠埃希氏菌;第10部分：淡紫拟青霉；-第11部分：雅致小克银汉霉；一第12部分：哈茨木霉；第13部分：黄孢原毛平革菌，一第14部分：焦曲霉；第15部分：解淀粉芽孢杆菌；-第16部分：类产碱假单胞菌；第17部分：恶臭假单胞菌。本部分为SN/T4624的第2部分。本部分按照GB/T1.1-—2009给出的规则起草。本部分由国家认证认可监督管理委员会提出并归口。本部分起草单位：中华人民共和国辽宁出入境检验检疫局。本部分主要起草人：王芳、贾金生、张波、张明、李蓉娟。 SN/T 4624.2—2016入境环保用微生物菌剂检测方法第2部分：短小芽孢杆菌1范围SN/T4624的本部分规定了人境环保用微生物菌剂符合性检验短小芽孢杆菌的形态学鉴定、生化鉴定、分子生物学检测方法。本部分适用于人境环保用微生物菌剂符合性检验短小芽孢杆菌检测和鉴定。2规范性引用文件下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其必威体育精装版版本(包括所有的修改单)适用于本文件。GB/T6682　分析实验室用水规格和试验方法3:主要试剂和培养基3.1实验用水：应符合GB/T 6682中级水的规格。3.2营养琼脂:见附录 A 中 A.1。3.3营养肉汤：见 A.2。3.4革兰氏染色法相关试剂：见A.3。3.5接触酶：见 A.4。3.6氧化酶：见 A.5。3.7糖发酵管：见 A.6。3.8柠檬酸盐：见A.7。3.9硝酸盐还原：见A.8。3.10淀粉水解：见A.9。3.11明胶：见A.10。3.12TE缓冲液(pH 8.0):见 A.11。3.131%～3%琼脂糖凝胶:见 A.12。25 mmoi/L EDTA:见 A.53 mol/L 醋酸钠：见 A.14。3.16dNTP:dATP,dTTP,dGTP,dCTP。3.17TBE:见 A.15。3.18Taq DNA 聚合酶。3.19细菌基因组 DNA 提取试剂盒。3.20 琼脂糖。3.21溴化乙锭。3.22DNA分子量标记:100 bp DNA ladder。 SN/T 4624.2--20164主要仪器和设备4.1电子天平（感量0.01g）。4.2恒温培养箱:36℃±1℃、50℃士1℃4.3恒温振荡培养箱：36℃±1℃。4.4恒温水浴锅。4.5台式冷冻离心机（最高转速15000r/min）。4.6PCR 扩增仪。4.7生物显微镜：10×～100×。4.8厌氧培养装置：36℃土1℃。4.9微量移液器和灭菌吸头：10 μL、20 μl、200 μL、1000 μL。4.10高压灭菌锅。4.11PCR超净工作台。4.12电泳仪。4.13核酸/蛋白分析仪。4.14凝胶成像系统。4.15无菌培养皿：直径90mm。5样品制备、培养5.11以无菌操作取1g(mI)样品加人到100 mL生理盐水中混匀，移取1环菌连续划线接种 5个营养琼脂平板，36℃±1℃培养18 h～24 h。取样过程中，在样品旁边放置1个营养琼脂平板作为空白对照。5.2挑取平板上3~~5个白色或淡黄色、半透明或不透明、边缘光滑的菌落进行形态学鉴定。5.3挑取符合形态学特征单菌落转营养琼脂平板纯培养，36℃±1℃条件下培养18h～24h；再从纯培养平板上挑取菌落接种营养肉汤，36℃士1℃条件下180r/min振荡培养18h