SN_T 4632-2016小西葫芦黄花叶病毒检疫鉴定方法.pdf

SN中华人民共和国出入境检验检疫行业标准SN/T 4632—2016小西葫芦黄花叶病毒检疫鉴定方法Detection and identification of Zucchini yellow mosaic virus2016-08-23 发布2017-03-01实施中华人民共和国发布国家质量监督检验检疫总局S 中华人民共和国出人境检验检疫行业标准小西葫芦黄花叶病毒检疫鉴定方法SN/T4632—2016*中国标准出版社出版北京市朝阳区和平里西街甲2号（100029)北京市西城区三里河北街16号（100045）总编室：（010址中国标准出版社秦皇岛印刷厂印刷*印张1字数26千字开本880×12301/162017年12月第一次印刷2017年12月第一版印数1—500*书号：1550662-32378 SN/T 4632—2016前言本标准按照GB/T1.1一2009给出的规则起草。本标准由国家认证认可监督管理委员会提出并归口。本标准起草单位：中华人民共和国河南出人境检验检疫局、中华人民共和国厦门出人境检验检疫局、广西大学、中国农业科学院郑州果树研究所。本标准起草人：赵忠懿、韩英、李萌、宋南、廖富荣、朱英芝、彭发青、代玉华、吴会杰- SN/T 4632-2016小西葫芦黄花叶病毒检疫鉴定方法1范围本标准规定了小西葫芦黄花叶病毒的检疫鉴定方法。本标准适用于进出境种子、苗木、组培苗等植物性繁殖材料及新鲜或保鲜瓜果中小西葫芦黄花叶病毒的检疫鉴定。2夫规范性引用文件下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其必威体育精装版版本（包括所有的修改单）适用于本文件。SN/T1840植物病毒免疫电镜检测方法SN/T 2122：进出境植物及植物产品检疫抽样方法3小西葫芦黄花叶病毒基本信息学名：Zucchini yellow mosaic virus缩写：ZYMV分类地位：马铃薯Y病毒科（Potyviridae）、马铃薯Y病毒属（Potyuirus）其他信息参见附录A。4方法原理小西葫芦黄花叶病毒的血清学特性和分子生物学特性是检疫鉴定的主要依据。51仪器设备和主要试剂5.1仪器设备酶联检测仪、天平（感量：1/10000g）、pH计（测量精度：士0.05pH）、微量榨汁机、高速冷冻离心机、植物光照培养箱（温度可调范围0℃～50℃）、隔离温室、透射电子显微镜（放大倍数：20万倍）、PCR仪、电泳仪、电泳槽、凝胶成像系统、恒温水浴锅、低温冰箱等。5.2用具微量移液器（2.5μL、10μL、20μL、100μL、200μL、1000μL）、酶联板、研钵、eppendorf管、铜网（400目）、滴管、尖头小镊子、Whatman滤纸、塑料培养血、洁净玻璃片、Parafilm、花盆、灭菌土等。5.3主要试剂酶联免疫吸附测定试剂（见附录B）、RT-PCR检测试剂（见附录C）。1 SN/T 4632—20166抽样与样品制备6.1抽样按照SN/T2122的规定执行。6.22样品制备6.2.1种子样品将种子播于灭菌土中，于25℃生长并进行症状观察。待长出3片～4片叶后将表现症状的植株编号，未表现症状的植株分组（10株为1组）并编号。采集叶片进行酶联免疫吸附测定及RT-PCR检测。6.2.2苗木样品将苗木种植于隔离温室中，于25℃生长并进行症状观察。有症状的苗木或种薯单独检测。没有症状的分组检测，分组方法和检测方法同6.2.1。6.2.3组培苗样品直接取组培苗进行分组和检测，方法同6.2.1。6.2.4瓜果样品直接取新鲜或保鲜瓜果样品（重点选取带有畸形、变色等病毒病症状的样品）进行分组和检测，方法同6.2.1。7检测方法7.1酶联免疫吸附测定见附录B。7.22免疫电镜检测按照SN/T1840的规定执行。7.33RT-PCR检测见附录C。8结果判定酶联免疫吸附测定或免疫电镜检测为阳性，RT-PCR检测亦为阳性，可判定待检样品带有小西葫芦黄花叶病毒。9样品保存9.1样品保存经检验确定携带小西葫芦黄花叶病毒的种子保存在4℃，病株在一20℃或者一80℃冰箱中保存，2 SN/好标记和登记工作。9.2结果记录与资料保存完整的实验记录包括：样品的来源、种类、时间、实验时间、地点、方法和结果等，并要有经手人和实验人员的签字。酶联测定需有酶联板反应的原始数据，RT-PCR检测需有电泳结果图片。3 SN/T 4632--2016附录A（资料性附录）小西葫芦黄花叶病毒其他相关信息A.1寄主范围ZYMV主要侵染葫芦科植物，也可侵染苋科、豆科、菊科、藜科、唇形科、伞形科、玄参科、毛科和番杏科等9个科的部分植物。A.22病害症状被ZYMV侵染的葫芦科植物，叶片大多黄化并带有严重花叶、畸形等症状，果实常