NYT 1186-2006猪支原体肺炎诊断技术.pdf

ICS 11.220B 41NY中华人民共和国农业行业标准NY/T 1186—2006猪支原体肺炎诊断技术Diagnostic techniques for swine mycoplasmal pneumonia2006-07-10 发布2006-10-01实施中华人民共和国农业部发布 NY/T 1186—2006前言猪支原体肺炎又称猪喘气病,是由猪肺炎支原体引起猪的一种接触性传染病,是造成养猪业经济损失最重要的疾病之一。本病以咳嗽和气喘为主要临床特征,病变部位主要在肺部,可见心叶、中间叶和尖叶有融合性支气管肺炎变化。本病广泛流行于世界各地,欧洲、亚洲、美洲、非洲以及大洋洲等主要养猪国家和地区均有发生。本标准的附录 A为规范性附录。本标准由中华人民共和国农业部提出。本标准由全国动物防疫标准化技术委员会归口，本标准起草单位：农业部动物检疫所、西北农林科技大学。本标准主要起草人：郑增忍、张衍海、王娟、张彦明。I NY/T 1186—2006猪支原体肺炎诊断技术1 范围本标准规定了猪支原体肺炎的病原分离和鉴定及间接血凝试验技术。本标准适用于猪支原体肺炎的诊断。2 规范性引用文件下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款。凡是注日期的引用文件,其随后所有的修改单(不包括勘误的内容)或修订版均不适用于本标准，然而，鼓励根据本标准达成协议的各方研究是否可使用这些文件的必威体育精装版版本。凡是不注日期的引用文件,其必威体育精装版版本适用于本标准。GB 4789.28食品卫生微生物学检验染色法、培养基和试剂3临床诊断和病理学检查3.1 临床症状猪支原体肺炎是种发病率高死亡率低的慢性呼吸道传染病,主要临床症状为慢性干咳。新发病猪群常呈急性,张口喘气，痉挛性阵咳,死亡率 30%左右。体温升高不明显。咳嗽持续几周或甚至数月，育肥猪咳嗽最严重。部分患猪呈腹式呼吸，喘息沟明显。食欲减退,消瘦,背毛粗糙,生长停滞,病程主要分急性、慢性两种类型。3.2 病理变化主要病变见于肺、肺门淋巴结和纵隔淋巴结。急性死亡患猪肺有不同程度的水肿和气肿。肉眼病变类似于膨胀不全的肺,尤其在疾病的慢性阶段。特征性病变是两肺的心叶、尖叶和膈叶前缘发生对称性的实变,肺门淋巴结肿大。肺中间叶实变,以及肺门淋巴结肿大、增生,病变最初为粟粒大至豆大呈均匀的散布,逐渐扩展而融合成支气管肺炎。病变部界限明显，灰白色、无弹性，“胰样”“鱼肉样”。切开时，内有大量泡沫。其他器宫无明显变化。3.3病理组织学检查典型病变组织通过用常规的病理切片、染色、脱色后观察，支气管和细支气管上皮组织纤毛数量减少,小支气管周围的肺泡扩大,泡腔充满多量炎性渗出物,肺泡间组织有淋巴样细胞增生。急性病例中，扩张的泡腔内充满浆液性渗出物,杂有单核细胞,中性粒细胞，少量淋巴细胞和脱落的肺泡上皮细胞。慢性病例,其肺泡腔内的炎性渗出物中,主要是淋巴细胞浸润。3.4X线检查X线检查对本病的诊断有重要价值,对可疑患猪进行X线透视,可作出诊断。在 X线检查时,猪只以直立背胸位为主，侧位或斜位为辅。病猪在肺野的内侧区以及心膈角区呈现絮状及片状阴影,且肺纹理清晰。4病原分离和鉴定4.1材料准备4.1.1 培养基A26肉汤：制备方法见附录A.1。固体培养基：制备方法见附录A.2。1 NY/T 1186—200厌气肉肝汤：制备方法见附录A.3。血琼脂平板：按GB4789.28的方法配制。4.1.2其他材料灭菌棉拭子。Hanks液：配制方法见附录A.4。0.25%鸡红细胞液。4.2病料采集4.2.1活体病料采集：用棉试子深擦病猪的喉头或鼻腔,采集呼吸道分泌物。4.2.2死后病料采集:无菌操作采取具有特征的病肺与健肺连接处的肺组织。4.3病原分离将病肺组织剪成 2 mm3 以下的碎块,浸人 Hanks 液中洗涤,除去血液和组织碎块,取 3 块～5 块浸泡在盛有 5mLA26肉汤的试管中；棉拭子浸入约10mLA26肉汤中清洗,并压出棉花中残液,再经0.45μum 的滤膜过滤除菌,将滤液分装于试管。将上述试管置于含 5%～10% CO 环境或用胶塞塞紧管口，在37℃进行培养。1代～3代分离时须每经3d～5d,以20%的接种量连续进行移植；至4代～5代以后,再经 5 d～7 d连续转移以提高分离率。同时应设厌气肉肝汤、血琼脂平板作为细菌检查的对照。通过连续继代，当培养物出现有规则的变化时，应涂片镜检；同时将液体培养物作适当稀释后再接种于固体培养基上,在含 5%～10% CO2的环境中 37℃培养 3d～10 d。培养时应逐日在低倍镜下观察,若出现圆形、边缘整齐、似露滴状、中央有颗粒、稍隆起的小菌落,判为可疑菌落,需进一步进行鉴定。4.4病原鉴定4.4.1溶血试验挑取可疑菌落接种于含猪或鸡红细胞的固体培养基上培养2d～3d,如为猪肺炎支原体,则菌落周围无溶血现