响应面法优化超声辅助水酶法提取油茶籽油工艺.docxVIP

响应面法优化超声辅助水酶法提取油茶籽油工艺 油茶是中国特有的木本油树种，也是世界四大木本油树种之一。经测试,油茶籽油的油酸及亚油酸含量均高于橄榄油,物理化学特性也与橄榄油非常相似。油茶籽油中还含有丰富的VE、VD、胡萝卜素、磷脂、角鲨烯等其他生物活性成分,长期食用后具有明显的预防各种心脑血管疾病、延缓动脉粥样硬化降血压、降血脂等功效,是一种优质的保健食用油。脱脂去皂后的饼粕还含有14%的粗蛋白,25%的粗脂肪,都是很重要的工业原料。 油茶籽油传统制取方法主要为压榨法和浸出法。水酶法作为一种新兴的植物油脂提取技术,与传统方法相比,具有操作温度低,能耗低,提取的油纯度高,磷脂含量、酸值及过氧化值低,色泽浅,污染少的优点,符合“安全、高效、绿色”的要求。目前,油茶籽油的水酶法制取方面国内还处于起步阶段。本试验将超声波辅助技术应用到油茶籽油的酶法提取中,摸索影响出油效率的工艺条件,同时对酶法提油茶籽油的酸值、过氧化值、苯并(α)芘以及VE、角鲨烯、不饱和脂肪酸等含量进行了分析测定,以揭示酶法提取工艺对油茶籽油营养品质、卫生品质及理化性质的影响,为油茶籽油综合开发利用提供借鉴。 1 材料和方法 1.1 试剂与标准品 油茶籽:2010年购自农户;30-60石油醚:国药集团化学试剂有限公司;硫酸、盐酸:衡阳市凯信化工试剂有限公司;氢氧化钠:西陇化工股份有限公司;无水乙醇、无水乙醚(分析纯):衡阳市凯信化工试剂有限公司;抗坏血酸:天津市化学试剂一厂;维生素E标准品:美国Supelco公司;3,4-苯并(α)芘标准品(99%):Sigma;角鲨烯标准品(纯度99%):北京恒元启天化工技术研究院;中性蛋白酶NCB-A5、纤维素酶AE80、果胶酶、α-淀粉酶:湖南尤特尔生化有限公司。 1.2 仪器、检测设备 SHA-B恒温水浴振荡器:江苏金坛市金城国胜实验仪器厂;UV754紫外可见分光光度计:上海精密科学仪器有限公司;GC-14C气相色谱仪(FID检测器)、LC-20AT高效液相色谱仪(紫外检测器,C18色谱柱)、AUY120电子分析天平(0.0001 g):日本岛津公司;KQ3200DA超声波清洗器:昆山市超声仪器有限公司;MAXI-MIXⅡ涡旋混合器:美瑞泰克科技有限公司;RE-52AA旋转蒸发器:上海雅荣生化设备仪器有限公司;DELTA 320 p H计:梅特勒-托利多仪器(上海)有限公司;JJ-1型定时电动搅拌器:江苏金坛市金城国胜实验仪器厂;LD5-10台式离心机:北京京立离心机有限公司。 1.3 测试方法 1.3.1 粮食、油脂营养成分的测定 水分测定:GB/T 5497—1985 105℃恒重法;粗脂肪测定:GB/T 14772—2008索氏抽提法;粗蛋白测定:GB/T 14489.2—1993凯氏法;淀粉含量的测定:GB/T 5514—2008粮油检验粮食、油料中淀粉含量测定;茶皂素含量的测定:参考文献。 1.3.2 蛋白水解率的测定 油茶籽→干燥→去壳→粉碎→40目筛下物→加缓冲溶液→90℃水浴加热30 min→调节p H和温度→加酶→反应→灭酶→破乳→离心分离→取上层清油→干燥至恒重→油茶籽油↓ 测蛋白水解率←干燥至恒重←残渣 1.3.3 工艺参数对油茶籽水酶法出油效率的影响 取20 g去壳粉碎后过20目的油茶籽,依照1.3.2工艺,分别研究超声时间、加热预处理时间、加热预处理温度、酶的种类、料液比、加酶量、酶解p H、酶解温度和酶解时间对油茶籽水酶法出油效率的影响。试验重复1次。 1.3.4 色谱条件试验 多因素试验采用Box-Behnken设计,利用响应曲面法进行分析优化。 采用反相高效液相色谱法对苯并(α)芘进行测定。其色谱条件如下:保护柱为Phenomenex C18(5μm,4 mm×3.0 mm);色谱柱:岛津inertsil ODS-SP C18柱(5μm,4.6 mm×250 mm);流动相:乙腈/水(90/10);流速:1.0 m L/min;激发波长384 nm,发射波长406 nm;柱温:35℃;进样量:10μL。 1.3.6 油、物理和主要营养成分的测定 1.3.6. 过氧化值的测定 酸价:参考GB/T 5530—2005动植物油脂酸值和酸度测定;过氧化值:参照GB/T 5538—2005油脂过氧化值测定;色泽:参考GB/T 22460—2008动植物油脂罗维朋色泽的测定;水分及挥发物含量:参照GB/T 5528—2008电烘箱105℃恒质量法;透明度、气味、滋味:参照GB/T 5525—2008感官鉴定法;VE:参照GB/T 5009.82—2003;脂肪酸:参考文献。 1.3.6. 角鸢烯标准系列溶液的配制 色谱柱:ZB-5(30 m×0.25 mm×0.25μm);升温程序:初温180℃,以10℃