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PEDV重组腺病毒疫苗的构建及小鼠免疫试验的开题报告

一、研究背景及意义

猪流行性腹泻病毒（PEDV）为一种重要的猪病毒，能引起急性水性腹泻并导致妊娠母猪流产等经济损失。目前，PEDV的疫苗研究尚处于起步阶段，而且常规灭活疫苗存在疫苗效果不稳定等问题。因此，开发一种高效、安全的PEDV疫苗势在必行。

近年来，重组腺病毒疫苗作为一种新型高效、安全、低成本、易生产的疫苗，已被广泛应用于人类及动物疫苗的研究和开发中。因此，利用重组腺病毒构建PEDV疫苗具有广阔的应用前景。

二、研究内容及目的

本研究选用腺病毒作为载体，通过重组技术，将PEDV重组基因插入载体中构建PEDV重组腺病毒疫苗。在此基础上，开展小鼠免疫试验，评估其保护效果及免疫机制，为进一步应用于猪的实验研究奠定基础。

本研究的具体研究内容包括：

1.PEDV重组基因的克隆与表达

对PEDV重组基因进行PCR扩增，选取正确大小的目标片段进行连接、转化、酶切和测序确认。将正确片段插入载体后，转染293细胞，利用Westernblot等方法检测基因表达情况，筛选得到PEDV重组腺病毒疫苗。

2.PEDV重组腺病毒疫苗的纯化及鉴定

通过腺病毒扩增和纯化，得到PEDV重组腺病毒疫苗。运用PCR、Westernblot等方法检测其合成是否成功，同时检测病毒滴度和病毒纯度。

3.PEDV重组腺病毒疫苗的小鼠免疫试验

将BALB/c小鼠随机分为实验组和对照组，实验组注射PEDV重组腺病毒疫苗，对照组注射PBS。利用ELISA、抗体中和试验等方法测试小鼠免疫应答情况，评价PEDV重组腺病毒疫苗的保护效果并初步探讨其免疫机制。

三、研究方法

1.实验材料

PEDV标准毒株、293细胞、腺病毒质粒（pAdEasy-1）、BALB/c小鼠等。

2.实验步骤

（1）选取PEDV重组基因并进行PCR扩增。

（2）将PCR产物连接到载体pAdEasy-1中，并通过转化纯化得到PEDV重组腺病毒疫苗。

（3）用Westernblot检测基因表达情况，并进行腺病毒扩增和纯化。

（4）检测PEDV重组腺病毒疫苗的纯度和滴度，并进行BALB/c小鼠免疫试验。

（5）利用ELISA及中和试验等方法评价PEDV重组腺病毒疫苗的免疫效果，并初步探讨其免疫机制。

四、预期成果及意义

本研究通过重组腺病毒技术，构建PEDV重组腺病毒疫苗，并在小鼠模型中进行初步评价。该研究的预期成果包括PEDV重组腺病毒疫苗的成功构建、纯化及鉴定，以及对其保护效果和免疫机制的初步探讨。

本研究的意义在于为PEDV疫苗的研制提供了新思路和技术支持，同时为开发安全有效的PEDV疫苗提供了参考。该研究的结果可为我国养猪业提供有效的疫苗保障，促进农业可持续发展。