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甘草中吡咯里西啶生物碱毒素分析方法的建立

摘要：吡咯里西啶生物碱（pyrrolizidinealkaloids,PAs）是植物的次生代谢产物，家畜采食后会导致中

毒，并在动物产品如奶、峰蜜和肝脏等中有残留。世界卫生组织（WHO）和联合国粮农组织（FAO）认为吡咯里西啶生物碱（pyrrolizidinealkaloids,PAs）是存在于食药产品中的一类严重的毒性成分。样品以甲醇作为提取剂，将其放入离心管中加入填料，在涡旋后进行常温超声提取，取上清液，残渣也同样提取离心，取上清液，将两次上清液合并后再次再次离心净化后经HPLC-MS/MS测定。研究结果显示促黑激素N-氧化物Intermedine-N-Oxide（8）和大尾摇碱N-氧化物Icdicine-N-Oxide（27）两种生物碱毒素在甘草中的平均回收率范围在91.7%~105.3%，变异系数范围为2.0%~9.3%，检出限范围为0.02和0.04ng/ml，定量限范围为0.1ng/ml。因此，该方法具有较好的准确性和精确性。可以作为分析食药同源农产品甘草中生物碱毒素的代谢规律以及残留消解的分析方法，为甘草中生物碱毒素的风险评估提供理论依据。

关键词：甘草HPLC-MS/MS促黑激素N-氧化物大尾摇碱N-氧化物吡咯里西啶生物碱

1、前言

1.1甘草简介

甘草在我国有4000年的使用历史，是一类我国著名的中草药，药用历史极长，如今已在全世界用作草药和食品添加剂。这种被被公认为是世界上重要药物的植物，自古以来就已被广泛种植。甘草在传统和民间医学中具有抗炎和抗病毒作用。但长期不合理使用甘草会出现水肿四肢无力等等不良反应。项目组于2019年对甘肃、内蒙、新疆等8个甘草主产区16家基地和加工厂开展了现场调研。甘草是国家二级重点保护野生药材，禁止乱采乱挖。随着甘草栽培技术日益更新，种植更加趋于规范化，逐步向产业化发展，国家将甘草列为首批中药现代化建设GAP中药材之一，目前我国甘草主要在甘肃、新疆以及内蒙古进行人工种植。甘草是我国重点保护的资源性产品，是国家出口配额管。

人类的活动以及包括对生物生存环境的破坏，野生的甘草数量逐年减少。虽然有人工种植的补充，但甘草在市场上仍是供不应求。为解决甘草短缺的问题，我国颁布了相关的政策，对进口进行奖励，并保护野生的甘草资源严禁私自开采。2017年甘草出口总量0.2549万吨，进口总量1.579万吨，可以看出我国甘草进口量远远高于出口量，已经成为我国进口中药材第二大品种，根据资料统计，我国的甘草需求量大概在6万到7万吨，进出口甘草的数量逐年增加。

现场调研过程中发现，甘肃大部分甘草分为两种一为乌拉尔甘草，另一种是新疆二红甘草，其种子是由乌拉尔甘草与光果甘草或胀果干草杂交而来，产量高，苷酸相对平衡。甘草还可以作为饲料喂养动物，其中甘草羊是自羔羊断奶后用甘草饲料喂养直至屠宰，屠宰后的羊肉呈弱碱性，膻味小，口感细腻。除此之外，一些甘草毛丁用作药

物提取，甘草下脚料用作饲料及发酵后用作兽药加工等。周黑鸭、久久鸭脖等产业也会采购甘草切片用作产品加

工。而这些甘草原料中的吡咯里西啶生物碱（pyrrolizidinealkaloids,PAs）是否会影响其加工产品，也值得进一步进行研究。

1.2PAs简介

吡咯里西啶生物碱（pyrrolizidinealkaloids,PAs）是一组只存在于植物体内的生物碱，但其对植物的本身并无毒性，而新鲜的植物由于其中含有生物碱毒素而降低了被草食性动物以及昆虫取食的风险，因此可作为对草食动物的防御化合物。迄今为止，已经在6000多种植物中鉴定出600多种PAs。

PAs具有众所周知的肝毒性，遗传毒性和致癌化合物，并在动物产品如奶、峰蜜和肝脏等中有残留，被公认为食品和饲料中的天然污染物，因此对人类和牲畜构成相当大的健康风险。PAs的种类多，不仅含有毒性，还能够作为药用成分。因其化学结构的不同其所含功效也有所不同，如抗肿瘤（野合百碱、千里光碱）、抗菌（欧天芥菜碱、毛果天芥菜碱）、抗炎、免疫刺激、免疫抑制、神经元保护等。PAs并不具备毒性，但它在生物体内代谢会生成代谢产物——代谢吡咯(metabolicpyrrole)。后者能够与生物体内的诸多蛋白质和基因物质结合，能够引起肝脏细胞的快速坏死以及较明显的癌变和致突变作用，但其毒性主要表现为肝毒性，不良服用会引起肝脏损伤。

图一吡咯代谢物的结构图Thestructureofpyrroles

甘草中两种残留浓度较高，频次较高的吡咯里西啶生物碱分别为促黑激素N-氧化物Intermedine-N-Oxide（8）和大尾摇碱N-氧化物Icdicine-N-Oxide（27）

促黑激素N-氧化物Intermedin