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结核病实验室诊断技术及应用主讲:xxx时间:xx年x月x日Diagnostictechnologyandapplications
01.结核病检测技术发展目录02.免疫学检测03.结核DNA检测技术04.常见的RNA检测技术
结核病检测技术发展LogoClickheretoenteryourtextandchangethecolororsizeofthetextPart01
全球范围内结核病疫情急剧恶化全球1/3人口(约20亿)已感染了结核菌,人口的大规模流动结核病与艾滋病同时流行结核菌耐多药菌株的出现我国是世界上仅低于印度和印尼的第三结核病大国患病率高,新发患者93万/年,结核菌感染率为约40%死亡率高,每年死亡人数达13万耐药率高早期快速诊断与治疗成为制约结核病防控的关键因素常规结核病实验室检测方法诊断阳性率不到60%。
细菌学检测的新方法发光二极管荧光显微镜(LED)液体培养(可同时缩短培养时间)自动化涂片/染色技术(夹层杯法)
分枝杆菌固体培养与液体培养比较液体培养(BDMGIT960)固体培养(罗氏L-J)疑似新发患者报阳时间(d)13.63±7.1428.67±10.04复诊患者报阳时间(d)22.94±9.5528.53±10.40疑似新发患者阳性率32.00%17.90%复诊患者阳性率9.30%2.60%污染率6.57%4.0%
免疫学检测LogoClickheretoenteryourtextandchangethecolororsizeofthetextPart02
WHO关于血清学检测声明2011年7月20日,世界卫生组织(WHO)正式声明,要求禁止将血清学检测方法(抗原,抗体,蛋白芯片等)用于肺结核和肺外结核的诊断。WHOwarnsagainsttheuseofinaccuratecommercialserologicaltestsforpulmonaryandextra-pulmonaryTB.蛋白质组学的发展3、4、7种结核杆菌优势表位抗原(16KD、38KD、MPT64、ESAT-6、CFP10、Mtb8、Mtb8.4、Mtb16.3)制备多靶点蛋白微阵列大量的文献报道其敏感性特异性均显著高于涂片与培养法可用于结核病的临床辅助诊断,提高痰涂片和痰培养假阴性的检测率
结核杆菌特异抗原:ESAT-6与CFP10ESAT-6:早期抗原靶6(EarlySecretedAntigenicRarget6)CFP10:培养滤液蛋白10(CultureFiltrateProtein10)由结核杆菌基因组RD1区相同的操纵子编码的蛋白所有的卡介苗(BCG)均丢失RD1和RD2绝大多数的环境分枝杆菌(NTM)也不存在RD1和RD2区
准确—T-SPOT临床诊断性能只针对结核分枝杆菌复合群敏感,与绝大多数环境分枝杆菌和卡介苗(BCG)无交叉反应FDA数据:特异性97.1%(297/306)国内临床数据:特异性94.1%(478/508)灵敏度基本不受免疫力低下/受抑制影响,在肺外结核患者中有很高的检出率FDA数据:灵敏度95.6%(175/183)国内临床数据:灵敏度95.3%(624/655)特异性
T-SPOT相关指南T-SPOT?.TB是采用γ-干扰素释放试验(IGRA)原理,获得FDA认证、欧盟CE认证和首个中国CFDA认证的商业化产品列入欧美25个国家结核诊疗指南2011年英国NICE指南、2010年必威体育精装版结核诊疗指南、2010年加拿大结核指南CDC推荐—卡介苗(BCG)接种人群结核感染检测首选国内风湿科和消化科已列入专家共识T-SPOT?.
快速—T-SPOT的实验步骤假阴性:感染阶段不同(窗口期)少数免疫系统功能不全/基础疾病的情况,如HIV感染者、肿瘤患者、婴幼儿等特殊肺外结核:结核性脑膜炎、粟粒性结核灵敏度相对较低实验非正常操作:细胞计数不够等T-SPOT结果解读-阴性结果
T-SPOT的应用优点:使用血液标本,取样简单;可用于肺内和肺外结核检测;阴性预测值很高,可用于排除结核感染。缺点:阳性预测值约80%,不能用于结核的确诊不能确定是否是肺结核(肺外)不能区分是活动性和潜伏性结核不能区分某些非结核分枝杆菌(堪萨斯、苏氏、戈登、海分枝杆菌)操作复杂,时间长;对于原发感染初期或免疫低下人群,可能存在假阴性。
结核DNA检测技术LogoClickheretoenteryourtextandchangethecolororsizeofthetextPart03
荧光定量
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