1.2 发酵工程的无菌技术（第2课时）高二生物（苏教版2019选择性必修3）.pptx

第一章发酵工程

第二节发酵工程的无菌技术选择性必修3高中生物学（2019苏教版）第2课时微生物分离、纯化和培养的无菌技术

核心素养学习目标01素养要求021.概述平板划线法分离和纯化微生物的过程。2.概述稀释涂布平板法分离和纯化微生物的过程。3.进行土壤中分解尿素的细菌的分离和计数。1.科学思维：能通过平板划线法和稀释涂布平板法的操作，掌握微生物分离和纯化的基本方法。2.科学探究：学会配制选择培养基，以分离出能分解尿素的细菌，并对实验结果进行分析和评价。

01平板划线法分离和纯化微生物

一、微生物的纯培养由单一个体繁殖所获得的微生物群体称为纯培养物，获得纯培养物的过程就是纯培养。1.概念：2.内容：1）配制培养基2）灭菌（培养基和器具）3）微生物接种4）分离5）恒温箱中培养在微生物学中，将接种于培养基内，在合适条件下形成的含特定种类微生物的群体称为培养物。

(1)酵母菌①酵母菌是真菌，可以进行生殖，也可以进生殖；②培养的最适pH为，最适生长温度为；③可以用液体培养基培养，也可以用固体培养基培养，但要获得纯化的酵母菌菌落，则需要通过培养基培养。单细胞出芽孢子4.5～5.028～30℃固体走进实验室：通过平板划线法获得纯化的酵母菌菌落(2)实验目的尝试通过平板划线法获得纯化的酵母菌菌落。(3)实验原理①培养基能满足酵母菌生长、繁殖的营养需要；②是实验室中进行微生物分离和纯化的常用方法之一。马铃薯葡萄糖琼脂平板划线法(4)实验器材和试剂酵母菌样本(菌种)；接种环、酒精灯、恒温培养箱、高压蒸汽灭菌锅；马铃薯葡萄糖琼脂培养基。

走进实验室：通过平板划线法获得纯化的酵母菌菌落(5)实验步骤①配制培养基称取去皮马铃薯200g，切成小块，加水1000ml，加热煮沸至马铃薯软烂，用纱布过滤。向滤液中加入20g葡萄糖、15-20g琼脂，用蒸馏水定容至1000ml（调pH）。②灭菌将配制好的培养基转移到锥形瓶中，加棉塞，包上牛皮纸，并用皮筋勒紧，再放入高压蒸汽灭菌锅中，在压力为103kPa、温度为121℃的条件下，灭菌15-20min。将5-8套培养皿包成一包，用几层牛皮纸包紧，放入干热灭菌箱内，在160-170℃灭菌2h（也可在高压蒸汽灭菌锅中一起灭菌）。包器材

倒平板的具体操作：③倒平板待培养基冷却至50左右时，在酒精灯火焰附近倒平板。倒平板注意事项：①温度：50℃左右②操作：在酒精灯火焰附近③冷凝后平板倒置12341.拔出锥形瓶的棉塞2.将瓶口迅速通过火焰2~3次，并转动瓶口，确保瓶口灭菌3.用拇指和食指将培养皿打开一条稍大于瓶口的缝隙，将培养基（10-20mL）倒入培养皿，立即盖上皿盖4.等待培养基冷却凝固后，将培养皿倒转过来放置走进实验室：通过平板划线法获得纯化的酵母菌菌落

1.培养基灭菌后，需要冷却到50℃左右时，才能用来倒平板。你用什么办法来估计培养基的温度？可以用手触摸盛有培养基的锥形瓶，感觉温度下降到刚刚不烫手即可。2.在倒平板的过程中，如果不小心将培养基溅在皿盖与皿底之间的部位，这个平板还能用来培养微生物吗？为什么？最好不要用这个平板培养微生物。防止空气中的微生物可能在皿盖与皿底之间的培养基上滋生。将所倒平板放入37℃的恒温箱中培养12h～24h，观察是否有菌落存在以确定是否被污染或灭菌是否彻底。4.怎么确定所倒平板未被杂菌污染？3.平板冷凝后，为什么要将平板倒置？因为平板凝固后，皿盖上会凝结水珠，将平板倒置，既可以防止皿盖上的水珠落入培养基，又可避免培养基中的水分过快蒸发。问题讨论

④平板划线法:通过接种环在固体培养基表面连续划线的操作，将聚集的菌种逐步稀释分散到培养基表面，从而获得单个菌落的方法。菌落：分散的微生物在适宜的固体培养基表面或内部可以繁殖形成肉眼可见的、有一定形态结构的子细胞群体，这就是菌落。单菌落：一般由一个细胞繁殖而来的肉眼可见的纯种菌落,即单菌落。微生物群连续划线分散或稀释单个细胞单个菌落生长繁殖走进实验室：通过平板划线法获得纯化的酵母菌菌落

连续划线法分区划线法平板划线法

“平板划线”实验操作1、将接种环放在火焰上灼烧，直到接种环烧红。2、在火焰旁冷却接种环，并拔出装有酵母菌的棉塞3、将试管口通过火焰.4、将已冷却的接种环伸入菌液中，蘸取一环菌液5、将试管通过火焰，并塞上棉塞6、左手将皿盖打开一条缝隙，右手将沾有菌种的接种环迅速伸入平板内，划三至五条平行线，盖上皿盖。注意不要划破培养基7、灼烧接种环，待其冷却后，从第一区域划线的末端开始往第二区域内划线。重复以上操作，在三、四、五区域内划线。注意