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miRNAs筛选与HPV病毒检测应用于宫颈癌筛查研究进展

【摘要】miRNAs作为与宫颈癌相关的生物标记物，其作用机制在宫颈癌早期筛查、早期治疗发挥着重要的作用，与HPV检测联合应用于高危人群的检测，能做到更早的预防，有效分流。优化筛查方法，挖掘更多的miRNAs标志物，将其运用于宫颈癌早期筛查，仍需更多的基础研究进行探索。本文就miRNAs与癌症的关系、miRNAs水平与宫颈癌发生与发展、miRNAs与HPV的联合筛查等方面的研究进展进行综述。

【关键词】miRNAs；HPV病毒；宫颈癌；临床诊断

在全世界范围内，宫颈癌是妇科生殖系统恶性肿瘤之一，其高危对象为：有多个性伴侣、性生活过早、多孕多产、HPV感染、免疫功能低下、有宫颈病变史的女性。随着广泛开展宫颈癌筛查管理，宫颈癌的死亡率逐步降低，《美国预防服务工作组宫颈癌筛查指南》[1]显示，死亡率由2000年每百万人2.8人，下降至2015年每百万人2.3人。宫颈癌筛查的推广，可有效地发现早起病变，及时干预，进而阻断宫颈癌的发展。

1宫颈癌筛查概述

宫颈阴道镜检查，醋酸着色肉眼观察（visualinspectionwithaceticacid,VIA）和碘着色肉眼观察（visualinspectionwithLugol’siodine,VILI）,暴露宫颈，使用较大的棉球将醋酸溶液或碘液均匀地涂于宫颈表面，通过观察着色情况，对病变区域进行筛查。醋酸试验对宫颈上皮内瘤变（cervicalintraepithelialneoplasia,CIN）呈现白色，碘试验对CIN区不着色。Arbyn[2]研究发现，醋酸、碘试验对CINⅡ级筛检的灵敏度为79%，特异度为85%；对CINⅢ级筛检的灵敏度为83%，特异度为84%。碘试验灵敏度高于醋酸试验灵敏度约10%，两种测试方法特异度无明显区别。

宫颈细胞学检查，常用方法为巴氏细胞学和薄层液基细胞学检测法（thinprepcytologictest,TCT）。巴氏涂片法是使用阴道窥器扩张阴道内壁，暴露宫颈口，使用木质刮板刷出部分宫颈脱落细胞，直接涂到玻片上，通过显微镜观察是否存在病变。王晓林[3]对120例宫颈病变筛查患者进行分析，发现宫颈巴氏涂片法的灵敏度为83%，特异度为47%。TCT检测法使用专用的毛刷提取宫颈脱落细胞，置入固定液中保存，经过离心、制片、染色等步骤，对提取样本进行检查。低度鳞状上皮内病变（LSIL）等同于病理活检报告中CINⅠ级，高度鳞状上皮内病变（HSIL）等同于CINⅡ级、CINⅢ级。TCT检测技术对临床诊断宫颈癌的灵敏度为94%，特异度为71%。

宫颈癌基因检测，人乳头瘤病毒（humanpapillomavirus,HPV）检测，在宫颈口处使用取样刷提取足够的样本，并置入专用的固定液中，采用实时荧光定量聚合酶连反应（polymerasechainreaction,PCR）法，检测宫颈癌病毒DNA，PCR法对宫颈癌筛检灵敏度为89%，特异度为48%，灵敏度较高，但由于HPV一过性感染的发病率较高，限制了特异性[4]。

随着医学技术的不断发展和完善，宫颈癌的筛检率逐步提高，但这些检测方式有各自的局限性。细胞学检测对CIN的检测敏感性较低，存在漏诊的情况。大多数HPV感染是短暂的，但很少有细胞能持续感染，然而，HPV的持续感染不足以形成癌症，因为宫颈上皮细胞必须积累其他遗传和表观遗传变化，才能完全转为恶性肿瘤。致癌基因的扩增或激活突变，以及肿瘤抑制基因的失活突变，都是导致宫颈癌的常见因素。

2microRNAs与癌症

microRNAs（miRNAs）是已发现的宫颈癌相关的标志物之一，miRNAs是长度为19-25个核苷酸（nucleotide,nt）的非编码RNA，在基因表达调控方面发挥重要作用[5]。目前数据库中大约记录了2500个人类miRNAs，miRBase()和特异性miRNAs已被描述为作为致癌基因或肿瘤抑制因子。miRNAs的异常表达与HPV感染之间有重要关系[5]。

miRNAs作为宫颈癌及其前期病变的生物标志物，不仅需要从宫颈癌患者中提取标本，还需要从健康女性中选择合适的标本。应避免采用不适当的侵入性标本采集方法。miRNAs不仅在组织中过度表达，还会分泌到体液中，如血清、尿液、精液和阴道液中[6-7]。在膀胱癌患者中，尿液中miRNAs的分析可以产生一个有前景的特征。由于膀胱肿瘤与尿液直接接触，尿液是诊断膀胱肿瘤的理想体液。因此，宫颈黏液是一种理想的宫颈肿瘤定性材料。利用宫颈黏液进行综合微阵列分析，检测特异性miRNAs是否可以作为宫颈癌及其前期病变的生物标志物[8]。

路武豪[9]对28例咽喉鳞癌在miRNAs表达调控中的研究指出，