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各种微生物生化试验方法原理

通常利用生化试验的方法，检测细菌对各种物质的代谢作用及其代谢产物，称为细菌的生化

反应，常用于细菌的鉴别。

1、糖类分解产物

（1）糖发酵试验（carbohydratefermentationtest）不同种类的细菌对糖的分解利用能力不同，

一般以能否分解某种糖，是否产酸产气等现象来鉴别。例如大肠杆菌能分解葡萄糖和乳糖，

产酸且产气；而伤寒杆菌只分解葡萄糖产酸不产气，且不分解乳糖。这是因为大肠杆菌分解

葡萄糖等产生甲酸，经甲酸解氢酶的作用生成H2和CO2。而伤寒杆菌无此酶，故分解葡萄

糖只产酸不产气。

（2）VP试验（Voges-Proskauertest）产气杆菌将分解葡萄糖产生的两分子丙酮酸脱羧，生

成一分子乙酰甲基甲醇。乙酰甲基甲醇在碱性溶液中被空气中氧气氧化，生成二乙酰，二乙

酰可与培养液中含胍基的化合物（如蛋白胨中的精氨酸）反应，生成红色的化合物，此为

VP试验阳性。大肠杆菌分解葡萄糖不生成乙酰甲基甲醇，故VP试验阴性。

（3）甲基红试验（methylredtest）大肠杆菌和产气杆菌均属G-短杆菌，且都能分解葡萄糖、

乳糖产酸产气，二者不易区别。但两者所产生的酸类和总酸量不一：大肠杆菌可产生甲酸、

乙酸、乳酸、琥珀酸等，而产气杆菌只产生甲酸、乙醇及乙酰甲基甲醇。故大肠杆菌培养液

PH在4.5以下，加入甲基红指示剂呈红色，为甲基红试验阳性；产气杆菌培养液PH在5.4

以上，加入甲基红后呈桔黄色，为甲基红试验阴性。

（4）枸橼酸盐利用试验(citrateutilizationtest）产气杆菌在以枸橼酸盐为唯一碳源的培养基

上生长，分解枸橼酸盐产生CO2，并转变为碳酸盐，使培养基由中性变为碱性，含溴麝香

草酚蓝（BTB）指示剂的培养基由淡绿色变为深兰色，此为枸橼酸盐利用试验阳性。大肠杆

菌不能利用枸橼酸盐，故在此培养基上不能生长，培养基仍为绿色。

2、蛋白质及氨基酸的分解产物

（1）硫化氢试验（hydrogensulfidetest）有些细菌能分解培养基中的含硫氨基酸（如胱氨

酸、甲硫氨酸等）产生H2S，如遇醋酸铅或硫酸亚铁，能生成黑色的硫化物，为硫化氢试验

阳性。本试验常用于区别肠道杆菌的种类。沙门氏菌属通常为阳性;大肠杆菌、产气杆菌、

志贺氏菌为阴性。

（2）明胶液化试验（gelatinliguefactiontest）有些细菌具有明胶酶，能分解明胶使其失去

凝固能力而液化。变形杆菌、霍乱弧菌、绿脓杆菌、枯草杆菌等能液化明胶；大肠杆菌、沙

门氏菌则不能。

（3）吲哚试验（indoletest）有些细菌含有色氨酸酶，能分解蛋白胨中的色氨酸生成无色

吲哚，加入对-二甲基氨基苯甲醛，无色吲哚生成红色玫瑰吲哚，

为吲哚试验阳性。大肠杆菌、霍乱弧菌等吲哚试验阳性；产气杆菌、伤寒沙门氏菌为吲哚试

验阴性。

吲哚对二甲基氨基苯甲醛玫瑰吲哚

细菌的生化反应是鉴别细菌的重要手段：其中吲哚试验（I）、甲基红试验（M）、VP试验(V)

和枸橼酸盐利用试验（C），简称为IMVIC试验，常用于大肠杆菌与产气杆菌的鉴别。典型

的大肠杆菌的IMViC试验结果为“++--”，而产气杆菌是“--++”。

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实验四、微生物的快速鉴定和自动化分析技术

如何使微生物学技术方法快速、准确、简易和自动化，一直是微生物学工作者研究的热点，

尤其是临床医学方面，对微生物的快速准确鉴定，更是尤其是临床医学方面，对微生物的快速准确鉴定，更是时间就是生命时间就是生命。近20多年来，随

着微电子、计算机、分子生物学、物理、化学等先进技术向微生物学的渗透和多学科的交叉，

这方面已取得了突破性进展，许多快速、准确、敏感、简易、自动化的方法技术，不仅在微

生物鉴定中广为使用，而且在微生物学的其它方面也被采用，推动了微生物学的迅速发展。

一、微量多项试验鉴定系统

该系统的根本原理是根据微生物生理生化特征鉴定的结果，而进行的数码分类鉴定。这种技

术也称为简易诊检技术，或数码分类鉴定法。它是针对微生物的生理生化特征，配制各种培

养基、反应底物、试剂等，分别微量（约0.1ml）加入各个分隔室中（或用小圆纸片吸收），

冷冻干燥脱水或不干燥脱水，各分隔室在同一塑料条或板上构成检测卡。试验时加入待检测

的某一种菌液，培养2~48小时，观察鉴定卡上各项反应，按判定表判定试验结果，用此

结果编码，查检索表(根据数码分类鉴定的原理编制成)