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(19)中华人民共和国国家知识产权局
(12)发明专利说明书
(10)申请公布号CN101493447A
(43)申请公布日2009.07.29
(21)申请号CN200810188537.X
(22)申请日2008.12.19
(71)申请人鲁南制药集团股份有限公司
地址276005山东省临沂市红旗路209号
(72)发明人赵志全
(74)专利代理机构
代理人
(51)Int.CI
G01N30/90
C12Q1/02
权利要求说明书说明书幅图
(54)发明名称
一种检验葡萄糖氧化杆菌催化能力
的方法
(57)摘要
本发明属于微生物工程领域,具体
涉及生产米格列醇过程中检验葡萄糖氧化
杆菌催化能力的检测方法,包括摇瓶生物
转化过程、硅胶板层析和显色过程。本发
明操作简单、易行,对生产、研究很有意
义。既可以用于出发菌株的催化能力检
测,优选菌株,又可用于发酵结束菌丝体
的催化能力的检验,指导生产,极有应用
价值。
法律状态
法律状态公告日法律状态信息法律状态
权利要求说明书
1.一种检验葡萄糖氧化杆菌催化能力的方法,包括如下步骤:
1)将N-(2-羟乙基)-葡糖胺用纯化水溶解,加入葡萄糖氧化杆菌的菌丝体,放入恒温
振荡培养箱中转化;
2)将转化液离心,取上清液点样硅胶板,以甲醇-乙醇-氨水为层析液进行层析,然
后干燥硅胶板进行显色。
2.如权利要求1所述的方法,其特征在于,所述步骤1)中N-(2-羟乙基)-葡糖胺在水
中的重量百分比浓度为2%~8%,pH为4.5~6.5。
3.如权利要求1所述的方法,其特征在于,所述步骤1)中菌丝体与N-(2-羟乙基)-葡
糖胺的重量比为1~5∶1。
4.如权利要求1所述的方法,其特征在于,所述步骤1)中转化的条件为:恒温振荡
培养箱的转速为250rpm,温度为20℃,转化15小时。
5.如权利要求1所述的方法,其特征在于,所述步骤2)中甲醇-乙醇-氨水的体积比
为1~3∶1~3∶1~3。
6.如权利要求5所述的方法,其特征在于,所述步骤2)中氨水的浓度为25~28%。
说明书
技术领域
本发明属于微生物工程领域,具体涉及生产米格列醇过程中检验葡萄糖氧化杆菌催
化能力的检测方法。
背景技术
米格列醇(miglitol)是拜耳公司在1997年度上市的新型抗糖尿病药物。它是从杆菌
肉汤培养基中发现的一种新型肠道α-葡萄糖苷酶抑制剂,是1-脱氧野尻霉素的母
体修饰产物,属于N-取代-1-脱氧野尻霉素类型,结构与葡萄糖相似。尽管用化学
合成的方法能够制备米格列醇,但化学合成法制备米格列醇的步骤较多,米格列醇
分子中含有的四个手性中心也给化学合成带来了很大的困难。目前生产规模大多采
用生物合成来制备米格列醇。米格列醇的生物合成法据文献报道大致有二条路线:
一是先由野尻霉素或1-脱氧野尻霉素产生菌生物发酵,制备获得野尻霉素或1-脱
氧野尻霉素,然后再经过化学合成方法获得米格列醇,这是最原始的途径;二是应
用氧化葡糖酸菌转化制备米格列醇关键中间体N-取代-1-脱氧野尻霉素,其主要通
过化学合成-生物转化-化学合成的方法来制备。
US4266025,EP0477160,USP2001/0019837公布了另外的米格列醇的生产方法,
即化学合成结合生物催化的方法。但由于菌体活力不高,导致生物催化时间过长,
造成生产成本高,生产周期长,给工业化生产带来很大的障碍。
由于微生物酶的高效专一性,省略了化学合成过程中为达到专一地改造某个目的基
团必须进行的加入和脱除保护基团的步骤,大大简化了制备过程,提高了反应收率。
氧化葡糖酸杆菌用于转化特定底物制备1-脱氧野尻霉素及其衍生物具有很多优点:
1)转化液经离心除去菌体,无需分离纯化出中间体
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