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液相色谱常见问题及处理方法

液相色谱常见问题及处理方法

HPLC灵敏度不够的主要原因及解决办法

1、样品量不足，解决办法为增加样品量

2、样品未从柱子中流出。可根据样品的化学性质改变流动相或柱子

3、样品与检测器不匹配。根据样品化学性质调整波长或改换检测器

4、检测器衰减太多。调整衰减即可。

5、检测器时间常数太大。解决办法为降低时间参数

6、检测器池窗污染。解决办法为清洗池窗。

7、检测池中有气泡。解决办法为排气。

8、记录仪测压范围不当。调整电压范围即可。

9、流动相流量不合适。调整流速即可。

10、检测器与记录仪超出校正曲线。解决办法为检查记录仪与检测器，重作校正曲线。

为什么HPLC柱柱压过高

柱压过高是HPLC柱用户最常碰到的问题。其原因有多方面，而且常常并不是柱子本身的问题，您可按下面步骤检查问题的起因。

1、拆去保护预柱，看柱压是否还高，否则是保护柱的问题，若柱压仍高，再检查；

2、把色谱柱从仪器上取下，看压力是否下降，否则是管路堵塞，需清洗，若压力下降，再检查；

3、将柱子的进出口反过来接在仪器上，用10倍柱体积的流动相冲洗柱子，（此时不要连接检测器，以防固体颗粒进入流动池）。这时，如果柱压仍不下降，再检查；

4、更换柱子入口筛板，若柱压下降，说明您的溶剂或样品含有颗粒杂质，正是这些杂质将筛板堵塞引起压力上升。若柱压还高，请与厂商联系。一般情况下，在进样器与保护柱之间接一个在线过滤器便可避免柱压过高的问题，SGE提供的Rheodyne7315型过滤器就是解决这一问题的最佳选择。

液相色谱中峰出现拖尾或出现双峰的原因是什么？

1、筛板堵塞或柱失效，解决办法是反向冲洗柱子，替换筛板或更换柱子。

2、存在干扰峰，解决办法为使用较长的柱子，改换流动相或更换选择性好的柱子

如何解决HPLC进行分析时保留时间发生漂移或急速变化

漂移现象

1、温度控制不好，解决方法是采用恒温装置，保持柱温恒定

2、流动相发生变化，解决办法是防止流动相发生蒸发、反应等

3、柱子未平衡好，需对柱子进行更长时间的平衡

快速变化现象

1.流速发生变化，解决办法是重新设定流速，使之保持稳定

2、泵中有气泡，可通过排气等操作将气泡赶出。

3、流动相不合适，解决办法为改换流动相或使流动相在控制室内进行适当混合

HPLC仪器问题

1、我的HPLC泵压明显的偏高，请问可能的原因？

答：流速设定过高；流动相或进样中有机械杂质，造成保护柱、柱前筛板或在线过滤器阻塞；流动相粘度过大；柱温过低；缓冲盐结晶；压力传感器故障。

2、基线不稳，上下波动或漂移的原因是什么，如何解决？

答：a.流动相有溶解气体；用超声波脱气15-30分钟或用充氦气脱气

b.单向阀堵塞；取下单向阀，用超声波在纯水中超20分钟左右，去处堵塞物

c.泵密封损坏，造成压力波动；更换泵密封

d.系统存在漏液点；确定漏液位置并维修

f.柱后产生气泡；流通池出液口加负压调整器

g.检测器没有设定在最大吸收波长处；将波长调整至最大吸收波长处

h.柱平衡慢，特别是流动相发生变化时；用中等强度的溶剂进行冲洗，更改流动相时，在分析前用10-20倍体积的新流动相对柱子进行冲洗。

MW溶质的分子量

N色谱柱塔板数

NAPAN-乙酰普鲁卡因胺N-Acetylprocainamide（碱性溶质）

N0检测器的基线噪音

ODS十八烷基硅烷Octadecylsilyl

P色谱柱的压力降[通常以巴（bar）表示，也用psi；另外，也用作柱极性参数

PA普鲁卡因胺Procainamide（碱性物质）

PAH聚芳香烃PolyaromaticHydrocarbon

PESOS优化流动相的计算机软件（美国Perkin-Elmer产品）

pKa溶质酸性常数的负对数；当pH=pKa时，溶质中有一半是电离的

Rk保留值范围，Rk=（最末谱峰k’）/（最初谱峰k’）

RRM相对分离度图（通常N=10000）

Rs相邻二谱峰的分离度

S当流动相中的%B改变时，测量溶质保留值的变化速率的参数

SAL水杨酸SalicylicAcid

SEC尺寸排阻色谱法Size-exclusionchromatography

S/N信噪比Signaltonoisera