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液相基本术语及操作

液相色谱检测

1仪器的基本常识及术语

1.1仪器结构：液相色谱仪主要包括泵、进样器、色谱柱、检测器；

1.2仪器分类：液相色谱仪属于精密仪器中的色谱仪器；

按照分为离机制，吸附、分配、离子交换、亲和色谱，体积排阻色谱；

按照流动相与固定相的极性，分为正相色谱法和反相色谱法；

1.2.2高效液相色谱法的应用范围：高效液相色谱法适用于高沸点不易挥发、受热不稳定易分解、分子量大的，不同极性的有机化合物，生物活性物质和多种天然产物，合成的和天然的高分子化合物等。

1.3仪器检定：液相色谱仪检定周期为1年，在两次检定间期内进行一次期间核查，也可以根据情况增加核查次数；

1.4维护保养：对于液相维护方式主要是周维护和日维护，其中周维护包括联机系统及中工作站软件维护、数据库整理备份、检测器自检、维护单向阀、溶剂砂芯滤头、进样器、电机泵检查维护、溶剂瓶清洗等；日维护包括环境温度、环境湿度、色谱柱温度、压力流速、进样口是否洁净、进液处的砂芯过滤头是否洁净、流动相交换时是否有沉淀；

1.5色谱法的常用基本术语

基线：在色谱操作条件下,没有被测组分通过鉴定器时,记录器所记录的检测器噪声随时间变化图线称为基线.

死时间,保留时间及校正保留时间:从进样到惰性气体峰出现极大值的时间称为死时间,以td表示.从进样到出现色谱峰最高值所需的时间称保留时间,以tr表示.保留时间与死时间之差称校正保留时间.以Vd表示.

死体积,保留体积与校正保留体积:死时间与载气平均流速的乘积称为死体积,以Vd表示,载气平均流速以Fc表示,Vd=tdxFc.保留时间与载气平均流速的乘积称保留体积,以Vr表示,Vr=trxFc

峰面积：流出曲线(色谱峰)与基线构成之面积称峰面积,用A表示.

拖尾因子：是反映峰对称性的指标，计算公式：拖尾因子T＝W0.05h/2d1（其中W0.05h为5%峰高处的峰宽，d1为峰顶点至峰前沿之间的距离）。

峰高与半峰宽:由色谱峰的浓度极大点向时间座标引垂线与基线相交点间的高度称为峰高,一般以h表示.色谱峰高一半处的宽为半峰宽,一般以x1/2表示；

1.7色谱检测的特性

（1）灵敏度高；

（2）线性范围宽；

（3）分离度与柱效、选择因子、容量因子、分析时间的关系：

（4）分离度与柱效的平方根成正比，选择因子一定时，增加柱效；

（5）分配系数与分配比都是与组分及固定相的热力学性质有关的常数，随分离柱温度、柱压的改变而变化：一般通过改变固定相和流动相的性质和组成或降低柱温，可增大选择因子；

（6）增大选择因子的最有效方法是选择合适的固定液。对于液相色谱，

出现以下画面，画面上方的状态显示区会出现“Idle”[aidl]状态，表示开机测试正常。

2.2.2流动相

有机溶剂要求用色谱纯(进口名牌最好)，水或缓冲盐溶液要用超纯水(电阻率：18.2MΩ)，每48小时制备新鲜的水相流动相,尤其是100%含水流动相使用时间不超过两天。

6根管子都在液面以下。

溶剂的位置必须高于溶剂混合阀(GradientProportioningValve)。[greidi?ntpr?p?:??ni?v?lv]

清洗柱塞密封垫(SealWash)[si:l][w??]的溶液：含5%～10%甲醇的超纯水。

洗针液(NeedleWash)[ni:d?l][w??]：50%甲醇：50%水(该比例仅适用于反相试验)。

注:以上溶剂或溶液均需用0.45μm的膜过滤并超声脱气1分钟，用洁净的玻璃容器盛放,避免污染，同时玻璃容器应用超纯水来清洗而不能用自来水。

2.2.3灌注柱塞密封清洗

清洗操作步骤：

(1)回到Menu[menju:]画面，选择Diag；

(2)确定SealWash[si:l][w??]的管路放在正确的位置；

(3)按PrimeSealWash[praim][si:l][w??]，再按Start，直到清洗溶剂流出泵杆密封圈冲洗废液管，按Halt；[h?:lt]

(4)按Close。

注意：密封圈清洗(Sealwash)[si:l][w??]溶剂，在反相液相色谱中可使用Water/MeOH[methylalcohol甲醇]=90/10或Water/Acetonitrile[?sit?unaitril乙腈]=95/5(根据实际需要使用不同溶剂)。

2.2.4灌注针头清洗

操作步骤：回到Main[mein]的画面，选择Diag，选择Prime[praim]NdlWash。设定值为30秒，若想要多清洗几次时，请按StartAgain。

清洗溶剂：50%的甲醇溶液

注意：若上述清洗溶剂无法避免进样时的交叉污染，使用较强的溶剂系统来进行清洗操作。

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