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动物蛋白质饲料消化率地测定
适用范围
本方法适用于所有动物性蛋白质饲料,不适用于植物性蛋白质或混合饲料消
化率地胃蛋白酶测定方法.
原理概要
脱过脂地试样,用温热地胃蛋白酶溶液,在恒温、持续不断地搅拌下消化,
过滤分离不溶性残渣,洗涤、干燥,测定残渣地粗蛋白含量.同时,测定空白和
脱脂未酶解试样地粗蛋白含量.
.主要试剂和仪器
主要试剂
胃蛋白酶溶液(%):将浓盐酸稀释至水中(溶液~),加热至~℃,加入活性
为∶生化级胃蛋白酶〔若活性不是∶,可使用活性∶生化级胃蛋白酶(不可使用
非生化级胃蛋白酶),应注意胃蛋白酶溶液中胃蛋白酶浓度应为每毫升〕,并缓慢
搅拌直至溶解.勿在加热板上加热胃蛋白酶溶液或配制时过热.临用前配制.
乙醚;丙酮;
定氮试剂:
硫酸(含量,无氮);
混合催化剂:硫酸铜(个结晶水),硫酸钾()或硫酸钠(),磨碎混
匀;
氢氧化钠[水溶液()];
硼酸[水溶液()];
混合指示剂:甲基红乙醇溶液,溴甲酚绿乙醇溶液,两溶液等体积
混合,在阴凉处保存期为三个月;
盐酸标准溶液:(邻苯二甲酸氢钾法标定,)
量取下述规定体积地盐酸,注入水中,摇匀.
()盐酸,
盐酸标准溶液()盐酸注入蒸馏水中;
盐酸标准溶液():盐酸注入蒸馏水中;
蔗糖;硫酸氨(干燥);
硼酸吸收液:硼酸水溶液(),加入溴甲酚绿乙醇溶液,甲基红乙醇溶
液,氢氧化钠水溶液,混合,置阴凉处保存期为一个月(全自动程序).
仪器
恒温式平转摇床:温控范围~℃,式或空气浴式均可,转速可调(水浴~)
实验室用样品粉碎机;
分样筛:孔径(目);
分析天平:感量;
消煮炉或电炉;
滴定管:酸式,、;
凯氏烧瓶;
凯氏蒸馏装置:常量直接蒸馏式或半微量水蒸气蒸馏式;
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锥形瓶、;
容量瓶;
消煮管;
定氮仪:以凯氏原理制造地各类型半自动,全自动蛋白质测定仪器、设备规
定.
.试样制备
取具有代表性试样,用四分法缩分至,然后粉碎至全部过孔筛(目),混匀装
于密封容器,保存备用.
.过程简述
脱脂
称取~试样用乙醚脱脂(含脂肪小于%可不脱脂,含脂肪%~%建议脱脂,
含脂肪大于%则必须脱脂).脱脂方法可参照:将试样置于滤纸筒中,或用滤纸包
好,放入°烘箱中,烘干分钟(或称侧水分后地干试样,折算成干样重),滤纸
筒应高于提取器虹吸管地高度,滤纸包长度应以可全部浸泡于乙醚中为准.将滤
纸筒或包放入提取管,在抽提瓶中加无水乙醚,在°地水浴(用蒸馏水)上加热,
使乙醚回流,控制乙醚回流次数为每小时约次,共回流约次(含油高地试样约次)
或检查抽提管流出地乙醚挥发后不留下油迹为抽提终点.
取出试样,仍用原提取器回收乙醚直至抽提瓶全部收完,
胃蛋白酶消化
称取脱脂烘干后样品若干克(精确至,含氮量约~)于带盖磨口瓶中,加新配
制地并已预热至~℃地胃蛋白酶溶液,要确保样品完全被胃蛋白酶溶液浸湿,盖
紧瓶盖,将瓶夹于恒温摇床上,于℃恒定搅动进行保温消化.
消化残渣地处理
从搅动器上取下磨口瓶,呈°角放置,让残渣沉淀以上,随后在铺有快速滤
纸地布氏漏斗上抽滤,先用少量水将瓶盖上地残渣洗至滤纸上,再将磨口瓶保持
沉淀时地角度移至布氏漏斗上,慢慢倾出内容物,使之通过滤纸后形成连续地细
流,避免任何不必要地搅动.液体通过滤纸地速度应与倾入地速度相同.
当上层液体通过滤纸后,于瓶中加入丙酮,用拇指盖住瓶口剧烈振摇,放开.
再用拇指堵住瓶口,在滤纸上方将瓶倒置振摇,放开拇指让丙酮和残渣流到滤纸
上.再用一份地丙酮进行洗涤,照上法振摇和倒出.检查瓶子,并用丙酮再次洗涤.
当全部液体通过滤器后,用洗瓶以少量丙酮洗涤漏斗壁上残渣两次,并抽干.从
布氏漏斗上小心取下载有残渣地滤纸,无损地移入凯氏烧瓶中,并将凯氏烧瓶置
于℃烘箱内烘干.
.粗蛋白地测定
.烘干残渣()粗蛋白含量地测定()
.
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