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菌种的衰退复壮及保藏

菌种的衰退复壮及保藏

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衰退原因：①基因突变②分离现象

常见衰退现象：

菌落和细胞形态改变；

生长速度迟缓，产孢子越来越少；

代谢产物生产能力下降；

菌种衰退、复壮及保藏

一、菌种衰退与复壮

1.衰退（degeneration）

菌种在培养或保藏过程中，因为自发突变存在，出现一些原有优良生产性状劣化、遗传标识丢失等现象。

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①控制传代次数（普通在DNA复制过程中，碱基错配率是5×10-4，自发突变频率为10-8~10-9，采取良好菌种保藏方法，能够降低移种和传代次数）；

②创造适当培养条件；

③采取不易衰退细胞进行传代（对丝状微生物而言，通常采取稳定单核孢子进行接种）；

④采取有效菌种保藏方法。

预防菌种衰退方法

致病菌对宿主侵染能力下降；

抵抗力、抗不良环境能力减弱等。

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狭义复壮是指在菌种已发生衰退情况下，经过纯种分离和生产性能测定等方法，从衰退群体中找出未衰退个体，以到达恢复该菌原有经典性状办法；

广义复壮是指在菌种生产性能未衰退前就有意识经常进行纯种分离和生产性能测定工作，以期菌种生产性能逐步提升。实际上是利用自发突变（正变）不停地从生产中选种。

2、菌种复壮（rejuvenation）

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①纯种分离：（平板划线法、涂布法、倾注法、单细胞挑取法等）。

②经过寄主体内生长进行复壮（如Bacillusthuringiensis复壮）；

③淘汰已衰退个体（采取比较激烈理化条件进行处理，以杀死生命力较差已衰退个体）。

④采取有效菌种保藏方法。

菌种复壮办法

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二、菌种保藏

①存活，不丢失，不污染

②预防优良性状丧失

③随时为生产、科研提供优良菌种

选取优良纯种（最好是休眠体，如分生孢子、芽胞等），创造降低微生物代谢活动强度，生长繁殖受抑制，难以发生突变环境条件。（其环境要素是干燥、低温、缺氧、缺营养以及添加保护剂等）

1.目标：

2.原理：

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广泛搜集科研和生产菌种、菌株，并加以妥善保管，使之到达不死、不衰、不乱以及便于研究、交换和使用目标。

3.我国外菌种保藏机构

菌种保藏机构任务

菌种保藏机构

中国微生物菌种保藏委员会(CCCCM)

美国经典菌种保藏中心(ATCC)

英国国家经典菌种保藏所（NCTC）

法国里昂巴斯德研究所（IPL）

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休眠态

4.菌种保藏方法

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石蜡油低温保藏法：

橡皮塞取代棉塞、加石蜡油。

低温保藏法

方法：菌种管置4℃冰箱保藏，定时传代

原理：低温下，微生物代谢强度显著下降。

干燥保藏法

将菌种置于土壤、细纱、滤纸、硅胶等干燥材料上保藏。如砂土管法，适合用于放线菌、芽孢菌和一些真菌保藏，保藏时间几至几十年。

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真空冷冻干燥法

加有保护剂菌悬液在冻结状态下给予真空干燥。

适合用于各种微生物，便于大量保藏，菌种存活时间长，是当前最好保藏方法。

液氮超低温保藏法

将菌种置于保护剂中，预冻后保留在液氮超低温冰箱中（-196℃）。

适合用于各种微生物较理想保藏方法

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几个常见菌种保藏方法比较

方法名称

主要方法

适宜菌种

保藏期

评价

冰箱保藏法（斜面）

冰箱保藏法（半固体）

石蜡油封藏法*

沙土保藏法

冷冻干燥法

低温

低温

低温、缺氧

干燥、无营养

干燥、无氧、低温、有保护剂

各大类

细菌、酵母菌

各大类**

产孢子微生物

各大类

3~6月

6~12月

1~2年

1~

5~以上

简便

简便

简便

简便有效

简便有效

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