淋巴细胞亚群检测及临床应用.pptxVIP

淋巴细胞亚群检测

及临床应用

一、概述淋巴细胞来源于造血干细胞，主要分布于血液、淋巴液、淋巴器官和淋巴组织中。体内的淋巴细胞在血液与淋巴系统之间不断循环，被活化后具有进入外周组织的能力。健康人血液循环中的淋巴细胞大多数为未活化的，被激活后成为淋巴母细胞，增殖分化为记忆细胞和效应细胞而发挥作用。

一、概述流式细胞术（FlowCytometry，FCM）为淋巴细胞亚群检测标准方法。利用流式细胞术分析淋巴细胞亚群水平，可以帮助评价机体免疫状态，是目前广泛应用于临床各领域的重要检测指标。按照生物学功能和细胞表面抗原表达的差异，人类的淋巴细胞主要分为三个群：T细胞（CD3+）、B细胞（CD3-CD19+）、NK细胞（CD3-CD16+/CD56+）。T淋巴细胞又被分为两个亚群：T辅助/诱导淋巴细胞(CD3+CD4+）、T抑制/杀伤淋巴细胞(CD3+CD8+）。

一、概述

二、淋巴细胞亚群检测把全血加入到试剂中时，荧光标记的抗体会和白细胞表面抗原特异性结合，在采集时，细胞通过激光束使激光散射。被染色的细胞就会发出荧光。这些被仪器检测到的散射光和荧光信号提供了关于细胞大小、内部复杂度和相关荧光强度等信息。BD?Multitest检测试剂采用了荧光触发技术，能够直接对淋巴细胞群进行荧光设门，以减少门中的未裂解细胞或有核红细胞带来的污染。一个有着精确体积的样本在BD?Trucount绝对计数管中被直接染色。管中低压冻干的絮状沉淀物被溶解，释放出已知数量的荧光微球。在分析过程中，通过比较细胞事件数和微球事件数可以确定样本中阳性细胞的绝对数量（每微升细胞数）。1、检测原理

二、淋巴细胞亚群检测抗凝剂：EDTA(紫盖管)或肝素(绿盖管)。标本量：不少于1m。标本处理：标本应无溶血、无凝血，标本采集后应尽快处理，冷冻的标本不能使用。室温保存的抗凝全血，可稳定48h;染色固定后的样本在2~8℃条件下可稳定24h。患者准备：无须特殊准备，检查对象生活饮食处于日常状态，空腹为宜，静脉采血。2、样本要求

二、淋巴细胞亚群检测按照检测要求，分别向己编好号的试管中加入20μl单克降抗体和同型对照。分別向试管中加入混匀的100μl抗凝血。混匀，避光，室温孵育20-30min。溶血：可利用仪器/手工使用A/B/C裂解液进行裂解注：溶血前确认A/B/C管路充满并能打出液体)。上机测样(可根据样本情况选择洗或不洗上样)。3、操作步骤-品牌A

二、淋巴细胞亚群检测对于每个患者样本，使用样本识别号标记两支12mm×75mm管;使用字母(如A和B)区分这两支管。对于绝对计数，标记两支Trucoun管，而非12mm×75mm管。注意：使用前，确认Trucount微球处于管底部的金属网下。否则，丢弃该Trucoun并用另一支替换。不要将微球转移到另外一支管中。3、操作步骤-品牌B（四色淋巴细胞亚群试剂）

二、淋巴细胞亚群检测将20μl的D8/cD45/cD试剂移取到标记为图底包将20μl的Multitestcd3/cD16+cD56/cD45/cD19试剂移取到标记为B的管的底部如果使用Trucount管，确保移液液面刚好高于不锈钢网。不要接触微球。3、操作步骤-品牌B（四色淋巴细胞亚群试剂）

二、淋巴细胞亚群检测将50μl充分混匀的抗凝全血移取到各管的底部。注意：①避免让血液污染管壁，如果全血残留在管壁，则不能被试剂染色并且会影响结果。使用Trucount管时，精确移液非常重要②使用反向移液技术将样本移取到管壁，使其刚好高于不锈钢网。反向移液时，将按钮按至第二个刻度点。释放按钮时，过量样本将被吸入吸头中。将按钮按至第一个刻度点排出精确体积的样本，将过量样本留在吸头中。3、操作步骤-品牌B（四色淋巴细胞亚群试剂）

二、淋巴细胞亚群检测盖上管盖并轻轻混匀振荡进行混匀。在室温(20~25℃)环境下避光孵育向各管中添加450μl1×Multitest溶血素，注意：小心保护样本管，免受直射光照射。于室温下(20-25℃)进行此程序操作盖上管盖并轻轻混匀振荡进行混匀。室温(20-25℃)环境下避光孵育15min上机检测。3、操作步骤-品牌B（四色淋巴细胞亚群试剂）

二、淋巴细胞亚群检测取一支Trucounttube。用反向加样法加入50μl充分混匀的抗凝全血。注意血不要碰到试管底部的微球(Beads)。取20μlCD3/CD8/CD4/CD16+56/CD45/CD19加入绝对计数管中。注意：不要碰到血。涡旋混匀，室温避光放置15min取出加入450μl1×FACS：溶血素，充分混匀，避光放置10min。24h内上机用FACSCantoClinical软件获取2500个淋巴细胞进行检测，上机前应充分混匀。3、操作步骤-品牌B（六色淋巴细胞亚群试剂）

二