医用细胞生物学实验报告.docx

医用细胞生物学实验报告

实验一.显微镜的操作与细胞形态的观察

实验目的：

辩识光学显微镜的各部分结构，并熟悉其性能，；学习光学显微镜的使用方法。

掌握光镜下细胞的形态特点，观察细胞器的基本形态和结构，学习生物绘图的方法。

实验原理：

显微镜最重要的功能部件是物镜和目镜。被检标本放在物镜下方，光线通过标本后可在物镜的上方形成一个放大的倒立实像，目镜透镜将这实像放大并形成一个虚像，通过调焦观察，眼睛可看到这虚拟的图像。样品的总放大倍数可运用下列公式进行计算：物镜放大倍数×目镜放大倍数＝总放大倍数

细胞是生物体的基本结构单位，细胞有真核细胞和原核细胞，真核细胞包含细胞核，而原核细胞不含核。真核细胞的基本结构包括细胞膜、细胞质、细胞核、细胞壁(植物)。原核细胞比真核细胞更小，更简单。真核细胞和原核细胞都有细胞器，但原核细胞的细胞器通常是更简单且无膜包被，真核细胞中有各种细胞器，如线粒体、高尔基复合体、中心体等。经过细胞固定及特异染色体处理后，可在光学显微镜下观察到细胞形态及其细胞器。

实验方法及步骤：

1.认识显微镜的基本结构

机械部分：镜座、镜臂、镜柱、镜筒、粗(细)焦准螺旋、载物台、物镜转换器

光学部分：目镜、物镜

照明部分：聚光器、光圈、光源

2.显微镜的使用方法

以右手握住镜臂，左手托住镜座的方式将显微镜从镜箱内取出，轻轻地平放在实验台上，检查各部件完整后继续操作。使用前用纱布清洁机械部分，用镜纸以螺旋方式从里向外清洁镜头部位。低倍镜的使用：提取安放-对光-置片-调焦；高倍镜的使用：先用低倍镜观察视野，将物体移至视野中央并调焦直至清晰，然后用高倍镜局部观察。

3.细胞形态的观察

圆(球)形细胞—首先，在低倍镜下观察兔卵巢切片标本，视野中看到卵巢的外周部分有一些圆形的，呈淡红色的卵细胞，在高倍镜下观察，可以看见卵细胞的外周有一圈红色的透明带，在透明带的外周围绕有放射冠。

蝌蚪形细胞—将人精子涂片置于低倍镜下观察，视野中看到人精子为蓝色的小点，其形状很难看清。高倍镜下观察，可以看到细胞形状呈蝌蚪形，细胞头部椭圆形且着色较深，内有细胞核，细长的部分为尾部。

多边形细胞—在低倍镜下观察蝾螈表皮装片，会看到上皮细胞就像墙上的砖样紧密相连，细胞核呈深染的圆形或椭圆形结构，细胞质围绕细胞核，细胞膜深染，分隔各个细胞。

4.生物绘图

①图像力求真实、准确。

②图的大小、位置分配及各部分结构比例要恰当。

③主要运用点和线进行生物绘图。

④图的下方标明图的标题，图中各结构名称用尺引出平行线，结构名称注于线的末端。

实验结果：

通过老师的教学和学生本人的操作，基本了解了显微镜的基本结构以及使用方法，能够通过光学显微镜比较独立地完成对细胞形态的观察。

通过光镜对兔卵细胞的观察，观察到呈淡红色的卵细胞，进一步观察到该卵细胞的细胞核、细胞质、外围的透明带以及透明带外周围的放射冠。通过光镜对人精细胞的观察，明显观察到一个个蝌蚪状的人精细胞，也能准全分辨出其头部、细胞核、尾部。通过对蝾螈表皮细胞的观察，观察到上皮细胞的多边形结构像砖一样紧密相连，同时也能看出该细胞的细胞膜、细胞核、细胞质。通过光镜对不同细胞进行观察，不仅大致了解到该细胞的形态，也进一步增强对光镜使用的能力。

思考题：

1.如果装片倒置放于载物台上，会发生什么后果?

答：高倍镜的镜头会触碰玻片，可能会损伤镜头，也可能会损坏玻片。

2.为什么低倍镜观察时要调弱光线?

答：低倍镜下显微镜光圈大，进入物镜目镜的光线很刺眼，而且低倍镜下视野更宽，进入的光线更多，因此要调弱光线。

实验二.细胞内DNA的测定和细胞器的观察

实验目的：

学习并理解孚尔根反应的原理及方法。

观察DNA在细胞内的分布。

实验原理：

schiff试剂测定DNA的原理：

酸水解DNA，海脱氧核糖与嘌呤碱基的核苷键，脱去嘌呤碱，脱氧核糖开环形成终端为醛基的直链形式，醛基与schiff试剂中的无色亚硫酸品红反应形成紫红色化合物，从而将细胞中的DNA显示出来。

实验方法及步骤：

孚尔根反应(蟾蜍血涂片)

①取材，固定(将蟾蜍血涂片浸入到固定液中固定20～30min)

②水解：将固定后的蟾蜍血涂片放入染色缸中，加入3.5mol/l盐酸，在37℃下水解23～25min。

③漂洗：蒸馏水轻柔冲洗1min，用吸水纸吸净水分。

④染色：将蟾蜍血涂片浸入schiff试剂染色30min，注意schiff试剂避光使用。

⑤用新配制的亚硫酸溶液快速漂洗三次，1min/次。

⑥新鲜蒸馏水轻轻冲洗一分钟，晾干，镜检。

⑦放入0.5％亮绿染液中复染1min，轻轻冲洗后用吸水纸吸干水分，镜检。

实验结果：

1.高尔基复合体的观察

低倍镜下观察到许多黄色的神经细胞，这些细胞呈圆形或不规则形状，界限明显。在高倍镜下，看到细胞核为无色区，周围细胞质被染成黄色。有些细胞