- 1、本文档共46页,可阅读全部内容。
- 2、有哪些信誉好的足球投注网站(book118)网站文档一经付费(服务费),不意味着购买了该文档的版权,仅供个人/单位学习、研究之用,不得用于商业用途,未经授权,严禁复制、发行、汇编、翻译或者网络传播等,侵权必究。
- 3、本站所有内容均由合作方或网友上传,本站不对文档的完整性、权威性及其观点立场正确性做任何保证或承诺!文档内容仅供研究参考,付费前请自行鉴别。如您付费,意味着您自己接受本站规则且自行承担风险,本站不退款、不进行额外附加服务;查看《如何避免下载的几个坑》。如果您已付费下载过本站文档,您可以点击 这里二次下载。
- 4、如文档侵犯商业秘密、侵犯著作权、侵犯人身权等,请点击“版权申诉”(推荐),也可以打举报电话:400-050-0827(电话支持时间:9:00-18:30)。
- 5、该文档为VIP文档,如果想要下载,成为VIP会员后,下载免费。
- 6、成为VIP后,下载本文档将扣除1次下载权益。下载后,不支持退款、换文档。如有疑问请联系我们。
- 7、成为VIP后,您将拥有八大权益,权益包括:VIP文档下载权益、阅读免打扰、文档格式转换、高级专利检索、专属身份标志、高级客服、多端互通、版权登记。
- 8、VIP文档为合作方或网友上传,每下载1次, 网站将根据用户上传文档的质量评分、类型等,对文档贡献者给予高额补贴、流量扶持。如果你也想贡献VIP文档。上传文档
乙型肝炎病毒颗粒超离纯化;常用离心机;低速离心:6,000rpm以下;高速离心:25,000rpm以下;超速离心:30,000rpm以上;乙型肝炎病毒颗粒超离纯化;;;
1.离心力
2.相对离心力(RCF)
3.沉降速度
4.沉降系数(S)
5.沉降时间和沉清因子(K);乙型肝炎病毒颗粒超离纯化;;;乙型肝炎病毒颗粒超离纯化;沉降速度V
在离心力场的作用下,单位时间内沉淀物运动的距离
V=d2(ρp-ρm)ω2r
18μ(f/f0)
V大小与颗粒直径(d2)成正比
V与颗粒密度同介质密度差(ρp-ρm)成正比
V与外加离心场(ω2r)成正比
当颗粒密度等于介质密度时,沉降速度接近于零
V与介质粘滞度μ成反比,粘滞度增加速度减慢
V与颗粒形状有关.颗粒偏离球形越大f/f0的摩擦比也越大,速度越慢
;沉降系数(S)Svedberg
定义:单位离心力作用下的沉降速度
物理意义:被测颗粒达到极限速度时所需要
的时间.单位为秒.1S单位=10-13seconds
沉降系数与物质的质量、形状、密度等因素有关,也受温度,水化密度,pH的影响,在实际工作中通过实验测定.
蛋白质:1-100S核酸:10-1000S
病毒:100-1000S细胞核:106-107S
完整细胞:107-108S原核核糖体70S(30S,50S)
;沉清因子k和沉降时间t
K因子主要由转子决定。离心时,影响所需的沉降时间。
离心分离某一物质所需的离心时间
t=K/S试管中,分离所需的时间与距离成正比。K因子小,分离所需的时间更短。K因子还受转速影响,转速高,时间短。;各种离心方法;差速离心法;
溶解的细胞(组织匀浆液)
600g离心10min
沉淀(细胞核)上清液(含细胞膜、线粒体、溶酶体
核糖体、可溶性蛋白)
10000g离心10min
沉淀上清液
(细胞膜、线粒体、溶酶体)(核糖体、可溶性蛋白)
100000g离心3h
沉淀上清液
(核糖体)(可溶性蛋白);速度区带离心法;密度梯度离心法(预制梯度);密度梯度离心法(离心自成);各类超速离心机转子最高转速允许离心管内平均密度为1.2g/cm3,超过该密度,减速
rpm实际=1.2/实际密度×rpmmax
转子超过寿命也要减速使用;HBV颗粒分离;3.预制梯度等密度离心分离:制备1.0-1.27g/ml/蔗糖密度梯度液,SW41转头100,000g离心24小时后,分部收集.选择合并密度1.2-1.24g/ml管作电镜观察.
;预制梯度等密度离心分离:
石蜡油
样品0.5ml
30%蔗糖2ml
40%蔗糖2ml
50%蔗糖2ml
60%蔗糖2ml
70%蔗糖1ml
;梯度液的密度测定
1.
文档评论(0)