乙型肝炎病毒颗粒超离纯化课件.pptVIP

乙型肝炎病毒颗粒超离纯化;常用离心机;低速离心:6,000rpm以下;高速离心:25,000rpm以下;超速离心:30,000rpm以上;乙型肝炎病毒颗粒超离纯化;;;

1.离心力

2.相对离心力(RCF)

3.沉降速度

4.沉降系数(S)

5.沉降时间和沉清因子(K);乙型肝炎病毒颗粒超离纯化;;;乙型肝炎病毒颗粒超离纯化;沉降速度V

在离心力场的作用下,单位时间内沉淀物运动的距离

V=d2(ρp-ρm)ω2r

18μ(f/f0)

V大小与颗粒直径(d2)成正比

V与颗粒密度同介质密度差(ρp-ρm)成正比

V与外加离心场(ω2r)成正比

当颗粒密度等于介质密度时,沉降速度接近于零

V与介质粘滞度μ成反比,粘滞度增加速度减慢

V与颗粒形状有关.颗粒偏离球形越大f/f0的摩擦比也越大,速度越慢

;沉降系数(S)Svedberg

定义:单位离心力作用下的沉降速度

物理意义:被测颗粒达到极限速度时所需要

的时间.单位为秒.1S单位=10-13seconds

沉降系数与物质的质量、形状、密度等因素有关,也受温度,水化密度,pH的影响,在实际工作中通过实验测定.

蛋白质：1-100S核酸：10-1000S

病毒：100-1000S细胞核：106-107S

完整细胞：107-108S原核核糖体70S(30S,50S)

;沉清因子k和沉降时间t

K因子主要由转子决定。离心时，影响所需的沉降时间。

离心分离某一物质所需的离心时间

t=K/S试管中，分离所需的时间与距离成正比。K因子小，分离所需的时间更短。K因子还受转速影响，转速高，时间短。;各种离心方法;差速离心法;

溶解的细胞（组织匀浆液）

600g离心10min

沉淀（细胞核）上清液（含细胞膜、线粒体、溶酶体

核糖体、可溶性蛋白）

10000g离心10min

沉淀上清液

（细胞膜、线粒体、溶酶体）（核糖体、可溶性蛋白）

100000g离心3h

沉淀上清液

（核糖体）（可溶性蛋白）;速度区带离心法;密度梯度离心法(预制梯度);密度梯度离心法(离心自成);各类超速离心机转子最高转速允许离心管内平均密度为1.2g/cm3,超过该密度,减速

rpm实际=1.2/实际密度×rpmmax

转子超过寿命也要减速使用;HBV颗粒分离;3.预制梯度等密度离心分离:制备1.0-1.27g/ml/蔗糖密度梯度液,SW41转头100,000g离心24小时后,分部收集.选择合并密度1.2-1.24g/ml管作电镜观察.

;预制梯度等密度离心分离:

石蜡油

样品0.5ml

30%蔗糖2ml

40%蔗糖2ml

50%蔗糖2ml

60%蔗糖2ml

70%蔗糖1ml

;梯度液的密度测定

1.