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实验四电泳技术及详解演示文
稿
在是1\一共有45\于星期一
(优选)实验四电泳技术及
在是2\一共有45\于星期一
原理
1.许多生物分子带有电荷,在电场中可以发生
移动。
2.每种分子迁移率不同,一定时间内在电场中
的迁移距离不同。
在一定pH条件下,每一种分子都
-具有特定的电荷(种类和数量)、
大小和形状,在一定时间内它们
在相同电场中泳动速度不同,各
自集中到特定的位置上而形成紧
密的泳动带。这就是带电粒子可
以用电泳技术进行分离、分析和
鉴定的基本原理。
+
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二、电泳迁移率
•设一带电粒子在电场中所受的力为F,则
F=QE
(Q为粒子所带电荷,E为电场强度)
•根据Stoke定律,一球形分子在溶液中运动
所受的阻力f为:f=6πrηv
(v为分子移动速度;r为分子半径;η为介质
黏度)
在是4\一共有45\于星期一
•当分子达到动态平衡时,F=f
即QE=6πrηv
移项得v/E=Q/6πrη
v/E:表示单位电场强度时粒子运动速度,称
为迁移率,也称电泳速度,以表示。
因此上式也可表示为:=Q/6πrη
•从上式可推知,带电粒子在电场中的移动与:
粒子大小有关,颗粒愈小愈快
粒子的电荷有关,电荷愈多愈快
粒子的形状有关,愈接近球形愈快
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三、影响迁移率的因素
1.电场强度(E)
电场强度是指每厘米的电位降。电泳速度与电场
强度成正比。电场强度越高电泳速度越快。
根据电场强度大小,电泳可分为:
常压电泳:2~10V/cm
高压电泳:2~2V/cm
2.溶液的pH值
pH值决定带电颗粒的解离程度,决定物质所带
净电荷的多少。选择合适pH,使混合物中各成分所
带电量差别较大。
pHpI带负电pHpI带正电
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3.溶液的离子强度
缓冲液的离子强度越高,电泳速度越慢
一般在0.02-0.2mol/L。
4.电渗现象
在电场中液体对固体支持物的相对移动。
电泳介质多孔,且带有可解离的化学基团,
吸附正离子或负离子,使溶液相对带电。
应尽量避免选用有电渗作用的支持物。
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四、电泳的分
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