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多种研究显微镜的使用;光学显微镜的基本参数;2荧光显微镜的基本原理;一、倒置显微镜(invertedmicroscope):
物镜、聚光镜等位置颠倒；物镜－聚光镜的工作距离较长，可将盛有样品的培养皿、培养瓶直接放置在载物台上进行观察。
;二、体视显微镜(荧光);三、荧光显微镜(fluorescencemicroscope)：
利用较短波长的光(激发光)照射样品，使样品受到高能量激发，产生较长波长的荧光(发射光)，用来观察和分辨样品中产生荧光的物质的成分和位置。;2荧光显微镜的基本原理;2荧光显微镜的基本原理;Figure9-14MolecularBiologyoftheCell(?GarlandScience2008);2荧光显微镜的基本原理;Theopticalsystemofafluorescencemicroscope.
Afiltersetconsistsoftwobarrierfilters(1and3)andadichroicmirror(beam-splitting2);荧光显微镜
;;荧光显微镜结构及性能特点;注意事项：
1暗室内进行，打开汞灯5-10min稳定后再观察。
2荧光淬灭(光漂白)：激发光长时间照射会发生荧光减弱或消失，操作时注意及时用挡板阻挡激发光照射标本。
3汞灯关闭后需冷却30min后再重新启动（最好不要短时间内反复开关，标本应集中观察。）
4载物台前方黄色遮光板：最好不直接用肉眼看激发光，以防短波光中的紫外伤害。;LEICATCS-SP2;Theconfocalfluorescencemicroscope;2荧光显微镜的基本原理;?amitoticfertilizedeggfromaseaurchin(Psammechinus)waslysedwithadetergent,exposedtoananti-tubulinantibody.Confocalmicroscopyproducesanin-focusopticalsectionthroughthickcells.;普通荧光显微镜下，存在许多来自焦平面以外的荧光，使观察到得图像反差和分辨率降低。
Confocal激光共聚焦扫描显微镜在某一瞬间只用很小的一束光激发，发出的荧光通过一个pinhole小孔/狭缝后成像，保证只有来自该焦平面的光成像，来自焦平面以外的杂散光则被pinhole小孔挡住。所得图形更加清晰。
激光共聚焦显微镜的分辨率比普通荧光显微镜的分辨率提高1.4-1.7倍。;Whenviewedbyconventionalfluorescencemicroscopy,theimageisblurred.Thisblurringoccursbecausebackgroundfluorescenceisdetectedfromtubulinaboveandbelowthefocalplane.
Theconfocalmicroscopicimageissharp,particularlyinthecenterofthemitoticspindle.Inthiscase,fluorescenceisdetectedonlyfrommoleculesinthefocalplane,generatingaverythinopticalsection.
?Theemittedfluorescentlightpassesthroughapinholethatrejectsout-of-focuslight,therebyonlylightinfocuswiththeimageiscollected.;;Figure9-22MolecularBiologyoftheCell(?GarlandScience2008);同时打开2－3个观察通道;Figure9-32MolecularBiologyoftheCell(?GarlandScience2008);谢谢聆听！
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