第11讲动物细胞培养生物制药IIIppt课件.pdf

第11讲动物细胞生物制药应用

2010.11.2：世界肺炎日（第2个）

新民周刊l全球每年约160万人死于肺炎链球菌

2010,5.17-23.P76-9疾病，平均每38秒1名5岁下儿童死于此

病。导致儿童死亡的头号杀手，并高致

残：智力低下、癫痫（17%）、耳聋（

27.7%）。

l中国是10个肺炎发病率最高的国家之一

，1/4儿童携带病菌；死亡儿童该病占

46.8%。占西太平洋区的70%。

红霉素不敏感几乎达到100%，青霉素达

86%。

1983年23价肺炎链球菌夾膜多糖疫苗

PPV23诞生。2000年针对2岁以下儿童的

7价肺炎链球菌蛋白结合疫苗PPV7问世

。目前已经接种3亿剂，世界第一大单

个疫苗。

甲型H1N1流感病毒：2009年4

月墨西哥猪流感造成数150多

死亡事件，并在多个国家蔓延。

H5N1禽流感：2011年仍有爆发。

SARS病毒：2003年全世界性的

事件。

HIV病毒：艾滋病。

2009年12月3日，国家食品药

品监督管理局发现，江苏延申

和河北福尔生物制药股份有限

公司的7个批次人用狂犬病疫

苗存在质量问题。

2010年3月17山西疫苗事件

本节主要内容

1.杂交瘤技术生产单克隆抗体

2.病毒疫苗生产

本节关键问题

杂交瘤生产单克隆抗体的制备原理与技术流程

一杂交瘤技术生产单克隆抗体

问题回顾：什么是细胞融合？有什么优点或作用？

细胞融合（Cellfusion）是指使用人工方法使两

个或两个以上的细胞合并形成一个细胞的技术。

体细胞杂交：克服有性不亲和性，实现远源遗传

重组，在育种方面意义重大。

杂交瘤细胞：具有两亲本特性，生物制药。

多克隆抗体与单克隆抗体

动物脾脏有上百万个B淋巴细胞，一个细胞

就是一个克隆，它针对抗原上的一个抗原决

定族产生的抗体是单克隆抗体。

一种抗原通常具有多个不同的抗原决族，

因此能刺激多个B淋巴细胞产生相应的单克

隆抗体，因此血清中的抗体是针对不同抗原

决定族的单克隆抗体混合物，称为多克隆抗

体。

问题的引出

血液得到的只能是混合抗体，但是需要大量的仅

针对某一个抗原决定族的单克隆抗体，几乎是不

可能的，因此必须采用其他方法。

如果我们能分离得到只分泌某一种特异性抗体的

B淋巴细胞，不就可以大量生产相关单抗了吗？

问题：可以实现吗？有什么技术限制吗？

很难离体培养B淋巴细胞。

（一）历史发现

1975年，英国剑桥大学分子生物学研究室将已适

应于体外培养的小鼠骨髓瘤细胞与免

疫小鼠脾细胞（B淋巴细胞）进行融合，发现融

合形成的杂交瘤细胞具有双亲细胞的特征：即像

骨髓瘤细胞一样在体外培养中能够无限地快速增

殖，又能持续地分泌特异性抗体。

（二）杂交瘤技术

将骨髓瘤细胞与免疫的动物脾细胞融合得到即能够

分泌抗体又能在体外长期繁殖的杂交瘤细胞，经过

克隆化培养得到可以分泌单克隆抗体的杂交瘤细胞，

这种技术通称为杂交瘤技术（hydridoma

technique）。

（三）单克隆抗体应用领域

单克隆抗体的特点是：理化性状高度均一、生物

活性单一、与抗原结合的特异性强，广泛应用于

生物学和医学研究领域：

1.作为亲合层析的配体

2.作为生物治疗的导向武器

3.作为免疫抑制剂

4.探针

5.增强抗原的免疫原性

6.作为医学检