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第11讲动物细胞生物制药应用
2010.11.2:世界肺炎日(第2个)
新民周刊l全球每年约160万人死于肺炎链球菌
2010,5.17-23.P76-9疾病,平均每38秒1名5岁下儿童死于此
病。导致儿童死亡的头号杀手,并高致
残:智力低下、癫痫(17%)、耳聋(
27.7%)。
l中国是10个肺炎发病率最高的国家之一
,1/4儿童携带病菌;死亡儿童该病占
46.8%。占西太平洋区的70%。
红霉素不敏感几乎达到100%,青霉素达
86%。
1983年23价肺炎链球菌夾膜多糖疫苗
PPV23诞生。2000年针对2岁以下儿童的
7价肺炎链球菌蛋白结合疫苗PPV7问世
。目前已经接种3亿剂,世界第一大单
个疫苗。
甲型H1N1流感病毒:2009年4
月墨西哥猪流感造成数150多
死亡事件,并在多个国家蔓延。
H5N1禽流感:2011年仍有爆发。
SARS病毒:2003年全世界性的
事件。
HIV病毒:艾滋病。
2009年12月3日,国家食品药
品监督管理局发现,江苏延申
和河北福尔生物制药股份有限
公司的7个批次人用狂犬病疫
苗存在质量问题。
2010年3月17山西疫苗事件
本节主要内容
1.杂交瘤技术生产单克隆抗体
2.病毒疫苗生产
本节关键问题
杂交瘤生产单克隆抗体的制备原理与技术流程
一杂交瘤技术生产单克隆抗体
问题回顾:什么是细胞融合?有什么优点或作用?
细胞融合(Cellfusion)是指使用人工方法使两
个或两个以上的细胞合并形成一个细胞的技术。
体细胞杂交:克服有性不亲和性,实现远源遗传
重组,在育种方面意义重大。
杂交瘤细胞:具有两亲本特性,生物制药。
多克隆抗体与单克隆抗体
动物脾脏有上百万个B淋巴细胞,一个细胞
就是一个克隆,它针对抗原上的一个抗原决
定族产生的抗体是单克隆抗体。
一种抗原通常具有多个不同的抗原决族,
因此能刺激多个B淋巴细胞产生相应的单克
隆抗体,因此血清中的抗体是针对不同抗原
决定族的单克隆抗体混合物,称为多克隆抗
体。
问题的引出
血液得到的只能是混合抗体,但是需要大量的仅
针对某一个抗原决定族的单克隆抗体,几乎是不
可能的,因此必须采用其他方法。
如果我们能分离得到只分泌某一种特异性抗体的
B淋巴细胞,不就可以大量生产相关单抗了吗?
问题:可以实现吗?有什么技术限制吗?
很难离体培养B淋巴细胞。
(一)历史发现
1975年,英国剑桥大学分子生物学研究室将已适
应于体外培养的小鼠骨髓瘤细胞与免
疫小鼠脾细胞(B淋巴细胞)进行融合,发现融
合形成的杂交瘤细胞具有双亲细胞的特征:即像
骨髓瘤细胞一样在体外培养中能够无限地快速增
殖,又能持续地分泌特异性抗体。
(二)杂交瘤技术
将骨髓瘤细胞与免疫的动物脾细胞融合得到即能够
分泌抗体又能在体外长期繁殖的杂交瘤细胞,经过
克隆化培养得到可以分泌单克隆抗体的杂交瘤细胞,
这种技术通称为杂交瘤技术(hydridoma
technique)。
(三)单克隆抗体应用领域
单克隆抗体的特点是:理化性状高度均一、生物
活性单一、与抗原结合的特异性强,广泛应用于
生物学和医学研究领域:
1.作为亲合层析的配体
2.作为生物治疗的导向武器
3.作为免疫抑制剂
4.探针
5.增强抗原的免疫原性
6.作为医学检
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